コロノイドバリアの検証において、なぜ帰無仮説検定が重要なのですか？

帰無仮説検定を用いることで、観察されたバリア機能の変化が統計的に有意であるかどうかを客観的に評価でき、確実なターゲットバリデーションを裏付け、初期探索における偽陽性を減少させることが可能になります。

独立変数の分離は、コロノイド単層研究においてどのように適合しますか？

分化抑制剤や病原体への曝露などの変数を分離することで、上皮バリアの完全性に及ぼす影響を正確に帰属させることができ、メカニズム的な洞察とディスカバリーパイプラインの信頼性を高めることが可能です。

定量的タイトジャンクション測定により、スクリーニングにおいて何が可能になりますか？

タイトジャンクション形成を定量的に評価することで、化合物の効果を比較するための有用なデータが得られ、バリア特性を調節する候補物質の信頼性の高いスクリーニングと優先順位付けが可能になります。

なぜ、クロスファンクショナルなコロノイドワークフローにおいて再現性の要件が重要なのでしょうか？

再現性の確保により、チーム間でのバリア機能データの再現性と比較可能性が保証され、共同での意思決定が促進されるとともに、ポートフォリオの推進における再現性のない結果のリスクを低減できます。

バリア機能アッセイを実施する前に、どのような統計解析が必要ですか？

タイトジャンクションの定量化などのバリア完全性のアウトプットを統計的に分析することは、アッセイの性能を検証し、R&Dワークフローにおけるデータに基づいたgo/no-go決定を支持するために不可欠です。

宿主と病原体の相互作用を研究するためのバリア機能を持つヒトコロノイド単層の生成

JoVE Encyclopedia of Experiments

微生物学

0 閲覧数 • 2:04 分 • February 26th, 2026

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まず、コラーゲン被覆のウェルインサートを含むマルチウェルプレートから始めます。

井戸に膨張媒体を加えます。

培地中の栄養素は細胞増殖を促進し、分化阻害剤は幹状の状態を維持します。

大腸幹細胞培養由来の上皮細胞クラスターの懸濁液をウェル挿入し、インキュベーションします。

細胞はコラーゲンで覆われた表面に付着し、上下の区画から栄養を受け取ります。

阻害剤は細胞分化を防ぎ、細胞クラスターの増殖を促進します。

位相差顕微鏡を使って培養を観察します。

単一層が形成されたら、細胞分化阻害剤を含まない新しい培地に培養培地を置き換えます。

これにより、細胞が成熟した結腸上皮細胞へと分化し、密接合部が形成されます。

これらの細胞は粘液を分泌し、宿主と病原体の相互作用研究において生理学的な腸の障壁を模倣する機能的な単一層を発達させます。

各インサートの下の空間に600マイクロリットルの膨張液をピペットで注ぎます。バイアルから細胞懸濁液100マイクロリットルを各インサートにピペットで注入します。

プレートを組織培養インキュベーターに戻し、少なくとも12時間はそのまま放置してください。皿を振ったり急に傾けたりするのは避けてください。培養後、プレートを位相差光学顕微鏡に置き、対物レンズは2.5倍から10倍にします。

阻害剤なしの培地でリフレッシュして抑制治療を中止してください。培地を2〜3日ごとに更新し続け、水が合うまで続けます。