宿主と病原体の相互作用を研究するためのバリア機能を持つヒトコロノイド単層の生成

まず、コラーゲン被覆のウェルインサートを含むマルチウェルプレートから始めます。

井戸に膨張媒体を加えます。

培地中の栄養素は細胞増殖を促進し、分化阻害剤は幹状の状態を維持します。

大腸幹細胞培養由来の上皮細胞クラスターの懸濁液をウェル挿入し、インキュベーションします。

細胞はコラーゲンで覆われた表面に付着し、上下の区画から栄養を受け取ります。

阻害剤は細胞分化を防ぎ、細胞クラスターの増殖を促進します。

位相差顕微鏡を使って培養を観察します。

単一層が形成されたら、細胞分化阻害剤を含まない新しい培地に培養培地を置き換えます。

これにより、細胞が成熟した結腸上皮細胞へと分化し、密接合部が形成されます。

これらの細胞は粘液を分泌し、宿主と病原体の相互作用研究において生理学的な腸の障壁を模倣する機能的な単一層を発達させます。

各インサートの下の空間に600マイクロリットルの膨張液をピペットで注ぎます。バイアルから細胞懸濁液100マイクロリットルを各インサートにピペットで注入します。

プレートを組織培養インキュベーターに戻し、少なくとも12時間はそのまま放置してください。皿を振ったり急に傾けたりするのは避けてください。培養後、プレートを位相差光学顕微鏡に置き、対物レンズは2.5倍から10倍にします。

阻害剤なしの培地でリフレッシュして抑制治療を中止してください。培地を2〜3日ごとに更新し続け、水が合うまで続けます。