JoVE 実験百科事典
微生物学
0 回視聴 • 3:42 分 • February 26th, 2026
グループB 連鎖球菌 (GBS)という機会性細菌病原体の培養を例に挙げましょう。
培養液を新鮮な培地で希釈し、培養して活性化する細菌を得ます。
培養液を円錐形のチューブに移します。
遠心分離機で細菌をペレット処理し、その後上清液を捨てます。
バッファーでバクテリアを洗い流します。
再び遠心分離機で上清液を取り除き、細菌をバッファーに再懸浮させます。
次に、感染しやすい膣上皮を備えたホルモン処理済みのメスのマウスを使います。
ネズミを拘束しろ。細いピペットの先端を使って、GBS懸濁液を膣腔内に注入します。
ネズミを離し、尾を持ち上げて前足をしっかりとした地面に歩かせます。
これにより膣内腔内の接種点が保持され、GBSの遵守が可能になります。
膣の開口部に接種の逆流がないか検査してください。
付着した細菌は膣の上皮表面に定着し、感染を形成します。
膣感染のあるマウスモデルはさらなる研究の準備が整っています。
注射と同じ日に、トッド・ヒューイットブロス(THB)で5ミリリットルの液体培養液を37度のトッド・ヒューイットブロス(THB)で一晩培養します。
翌朝、GBSを新鮮THBに1〜10の体積でサブ培養し、37度の環境で2〜3時間の培養を行い、細菌がログの中間段階に達するまで続けます。その後、サブカルチャーを無菌の15ミリリットル円錐管に移し、細菌細胞を遠心分離します。ペレットを200マイクロリットルの滅菌PBSに再懸浮させます。
次に、懸濁液の総体積を10マウスあたり1ミリリットルのPBSに上げ、新しい5ミリリットル培養チューブでOD600 0.4にします。培養液を新しい15ミリリットルのチューブに移し、再び細菌をペレットで投与します。次に、細胞を元の体積の10分の1でPBSに再懸浮させます。
細菌50マイクロリットルをTHB寒天で連続希釈・プレート化し、接種物の正確なCFUを決定します。次に、200マイクロリットルのゲルローディングピペットの先端に10マイクロリットルのGBSを抽出し、最初の動物の首の首根っこにあるたるんだ皮膚を親指と人差し指の間に手動で固定し、尾を固定します。ピペットの先端を膣腔内に5〜10ミリメートル挿入し、接種量の全量を分散させます。
そしてすぐに後ろの後ろ枝を離し、尾を持ち上げて後ろの先端を持ち上げ、硬い地面を前足で歩きます。1分後に膣の開口部を目視で確認し、接種の逆流がないか確認してください。