マウス膣内腔におけるグループB 連鎖球菌 負荷のスワブおよび染色培養による定量化

膣内にB群 連鎖球菌 (GBS)という膣管の機会性細菌病原体を定着させたメスのマウスを例にとります。

マウスを拘束し、バッファー湿らせた綿棒を膣内腔に挿入します。

綿棒を優しく回転させながら膣壁に軽く圧力をかけ、表面に付着した細菌を取り除く。

綿棒を緩衝液に浸し、攪拌して細菌を懸浮させます。

バッファー内の懸濁液を連続的に希釈し、クロモゲンに結合した基質を含む染色差別寒天にプレートします。

細菌の増殖を許可するために培養してください。

培養中、GBSは染色基質を加水分解する特定の酵素を発現します。

放出されたクロモゲンは自然に酸化・二量体化し、ピンクまたはモーブ色の化合物を形成します。

これにより、他の細菌コロニーとは見た目で区別されるピンク色またはモーブ色のGBSコロニーができます。

コロニー数を数えてGBS負荷を定量化し、マウスモデルでの持続性を評価します。

綿棒検査の直前に、PBSで綿をあらかじめ湿らせ、先ほど示したようにマウスの1匹を拘束します。

綿棒を膣内腔に10ミリ挿入し、膣壁に軽く圧力をかけながら、時計回りに4回、反時計回りに4回優しく回します。

綿棒を100マイクロリットルのPBSを含む1.5ミリリットルのマイクロ遠心分離管に入れ、チューブを約15秒間ボルテックスして綿の繊維から細菌を除去します。次に、各サンプルをPBSで連続的に希釈し、製造元の指示に従って調製した差動中寒天プレートに1〜10〜10,000回の希釈を20マイクロリットルのプレートでプレートし、37度Cで24時間培養します。GBSのコロニーは鮮やかなピンク色かモーブ色をしています。