感染マウス膀胱内の細胞内細菌群集の可視化

まず、β-ガラクトシダーゼ発現性尿路病原性大 腸菌で事前に感染させた固定・解離マウス膀胱をシリコーンコーティングのマルチウェルプレートに置きます。

膀胱の腔は上向きになり、細胞内細菌群集(IBC)を含む上皮細胞が露出します。

バッファーで膀胱を洗い、ゴミや未付着の細菌を取り除いてください。

次に固定剤を加え、細胞や細菌の構造を保存するために培養します。

固定液を外してバッファーで洗います。

その後、洗剤入りの緩衝剤で洗浄し、細胞膜や細菌の膜を透過性にします。

バッファーを取り出し、その後、β-ガラクトシダーゼの基質であるX-ガル溶液に酸化還元試薬を添加して培養します。

X-galおよび酸化還元試薬が細菌に入ります。β-ガラクトシダーゼはX-ガロンを切断し、無色中間体を生成し、これを酸化還元試薬によって酸化して青色の沈殿物を形成します。

解離顕微鏡で膀胱の青い点がIBCsを確認し、尿路感染症を示しています。

IBC計測では、膀胱を採取した後、PBSを用いた6ウェルプレートのシリコンコーティングウェルに入れ、ハサミで半分に切ります。

小さな金属ピンを外縁に置き、膀胱を優しく広げて腔が上向きになり、最大限の尿路皮が露出するようにします。テキストプロトコルで示されたLacZ染色を行った後、解剖顕微鏡で青い点として見えるIBCを観察します。