マウスの アシネトバクター・バウマン感染による火傷創の生物発光イメージング

まずは麻酔をかけたマウスに、腹部の下にペトリ皿の蓋を置いて背中を水平に保つところから始めます。

マウスは背中にグラム陰性菌病原体である アシネトバクター・バウマンニイに感染した火傷を負っています。

細菌は生物発光オペロンを持つように遺伝子操作されています。

マウスを最適温度に保った生物発光イメージングチャンバーの中に置き、撮影を開始します。

感染部位では、生物発光オペロンの ルクA および ルックスB 遺伝子がルシフェラーゼ酵素をコードしています。 luxCDE 遺伝子はルシフェラーゼ基質を合成する酵素をコードしています。

ルシフェラーゼは基質の酸化を触媒し、可視光を発生させて細菌を発光させます。

生物発光信号は創傷部位に代謝活性のある細菌が存在することを示します。

画像診断ソフトウェアを用いて、生物発光信号の強度を定量化し、生存可能な細菌負荷を推定します。

接種直後にライブイメージングソフトを起動して発光画像を実施。コントロールパネルで「初期化」をクリックします。次に、温度ボックスの色が緑色に変わり、試料チャンバー内のステージ温度が37度に達したことを示します。

麻酔をかけたマウスを標本室の温かいステージに置き、感染した火傷をカメラの真下に置きます。次に、コントロールパネルで「Luminescence」の横にチェックマークを入れます。

次に「自動露出」を選択し、生体発光強度に基づいてライブイメージングソフトウェアによって露出時間を最適化します。「視野」ドロップダウンリストから「C」を選択してください。スキャン中距離オプションを選択して、ソフトウェアに焦点距離を判定させます。

次にオーバーレイの横にチェックマークを付けます。次に「取得」をクリックして画像をキャプチャします。次に、「画像ラベル編集」ボックスで「OK」をクリックします。「画像ウィンドウ」と「トールパレット」が表示されます。自動選択の自動ROIパラメータを設定してください。