組織生検における細菌の癒着を研究するためのin vitro平行プレートフローモデル

まず穿孔顕微鏡スライドを使い、穿孔部位に円形組織生検を置きます。

次にゴム製のガスケットをその上に貼ります。

このアセンブリを反転させて金属灌流室フレームの下部に挿入します。

上のフレームと下のフレームを合わせて固定します。

キャリパーを使って均一なチャンバーの高さを確認してください。

チャンバーはポンプに接続されており、ポンプはバッファー中に懸浮した細菌を含むリザーバーに接続されています。

細菌の懸濁液をチャンバーに灌流させ始めます。

スライドの中央の穿孔により、細菌の懸濁液がアセンブリ内に侵入できます。

これにより細菌と組織表面の相互作用が可能となり、接着と定着を促進します。

このセットアップにより、in vivoの細菌による組織定着を模倣したin vitroモデルが生成されます。

プロトコルを開始するには、直径10ミリメートル、同じ厚さの組織生検を顕微鏡スライドと8ミリメートルの円形穿孔の間に置き、内側が上向きのゴム製ガスケットを置いて細菌の懸濁液に接触させます。

ホルダーに入れる間は組織移植片の向きに集中してください。組織の内側の表面がすでに血流に露出し、実験培地に接触するようにしてください。

次に、ティッシュ入りのホルダーをチャンバーの下部金属フレームに埋め込まれたガスケットシートに挿入します。

上部の金属フレームと対応するガスケットシートを、事前に挿入したティッシュホルダーのチャンバー底部に取り付けます。その後、チャンバー全体を8本のネジとネジナットで取り付けます。キャリパーや定規を使って、グラフトごとにチャンバーの高さが常に同じであることを確認してください。

次にフローチャンバーを蠕動ポンプで接続します。次に400ミリリットルの液体リザーバーをチューブに接続します。蠕動ポンプと細菌貯蔵タンクを用いて、リン酸塩で緩衝された生理食塩水に100ミリリットルの蛍光標識コロニー形成単位の100ミリリットル懸液を灌流し、1平方センチメートルあたり3ダインの圧力と1分あたり4ミリリットルの流量で1時間かけて灌流します。同じ収集リザーバーを使って100ミリリットルの細菌懸濁液を連続的に循環させます。