アグロバクテリウム媒介による組換えウイルスクローンをトウモロコシの苗木への遺伝子沈黙投与

まずはトウモロコシの苗木を管理された条件下で育てて、宿主として機能させます。

次に、植物病原性細菌である アグロバクテリウム・トゥメファシエンスを例に挙げます。

遺伝子組換え細菌は組換えウイルスゲノムをコードするT-DNA構成体を持っています。このゲノムには、ターゲットとなるトウモロコシ遺伝子をサイレントするために挿入された遺伝子断片が含まれています。

細菌を植物の最も低い節である鞘の節のすぐ上に注入し、懸濁液が鞘を満たして内部組織に届けるまで続けます。

注射部位で、細菌はウイルスゲノムを運ぶT-DNAをトウモロコシ細胞に転送し、そこからウイルスRNAに転写され、さらに細胞質へと移行します。

RNAはウイルスタンパク質の生成を複製し、新たなウイルス粒子を形成して全身に広がり感染を確立します。

目的の遺伝子断片を持つウイルスRNAは植物のRNA干渉機構を活性化し、特定のトウモロコシmRNAを分解し、標的遺伝子を沈黙させます。

これにより、感染植物が成長するにつれて標的遺伝子によって調節される表現型に明らかな変化が生じ、壊死病変の形成などが見られ、遺伝子サイレンシングの成功が確認されます。

ア グロバクテリウムの注入には、4〜7日齢のトウモロコシの苗を使用しています。注射器と針を組み立てる。細菌懸浮液を鞘の節の2〜3ミリ上に優しく注入し、鞘を満たし、植物の成長段階に応じて輪の中で見える状態まで注ぎます。

すべての苗に注射し、各構造物を注射するための注射器と針を交換してください。葉の制御遺伝子、病変模倣22、またはフィトエン脱飽和酵素の消失による病変を観察することで表現型感染を確認できます。