植物根表面への細菌の付着の顕微鏡による評価

病原性細菌を含む砂で育てられた植物の苗木から根のサンプルを取ります。

試料を水とカバースリップで取り付けます。

位相差顕微鏡で観察することで、コントラストを強調し、根毛や細菌を染色せずに観察できます。

サンプルを水の入ったバイアルに入れます。

バイアルを逆さにしてサンプルを洗浄し、自由で緩く付着した細菌を取り除きます。

洗浄したサンプルをマウントします。

試料が厚い場合は、接着エッジを高くしたプレス貼布カバースリップを使用して試料の損傷を防ぎます。

カバースリップの中に水とサンプルを入れ、スライドを押して密封します。

スライドを逆さまにして顕微鏡で観察します。

根毛に付着している細菌の数を数えましょう。

テキストのプロトコルに従って細菌と植物を培養した後、顕微鏡スライド上の水滴または培養培地に置き、直接観察して顕微鏡用サンプルを準備します。

目に見える遊離細菌がいなければ、培養容器に細菌の死や結合が起きている可能性があります。サンプルを液体の入ったバイアルに入れて、優しく逆さまにして水または培養培地で洗浄します。次に、サンプルを新鮮な液体に浸したものの顕微鏡スライドに置いて観察します。

サンプルを取り付けるには、普通のカバースリップを使います。試料が厚くて膨らみができた場合は、液体と試料をプレスのウェルに加え、縁にゴムやプラスチックのリングが付いたカバースリップを貼ります。スライドを上に置き、そっと押してカバースリップをスライドに密着させます。

スライドを逆さまにしてサンプルを調べます。あるいは、藻類カウントスライドとカバースリップを同様の方法で使い、最大20倍の倍率で観察する方法もあります。