トマト苗の根系菌による病原性細菌の定着を評価するための生存細胞数

無菌砂で育てたトマトの苗を入れた容器を用意しましょう。

幼苗の根には、セルロース産生の野生型またはセルロース欠乏の変異株のいずれかが接種されます。

1つの容器から封材を取り出し、滅菌紙の上で逆さまにし、植物を含んだ砂筒を叩いて取り出します。

砂のシリンダーを縦に割って根を露出させます。

その後、根を滅菌バッファーに浸して振って、緩く付着した細菌を取り除く。

もう一方の根についても同じ手順を繰り返します。

洗った根を新しいバッファーに移します。超音波処理で密着した細菌を放出します。

これらの超音波処理懸濁液を使って連続希釈を準備し、寒天にプレートし、培養して生存可能な細菌がコロニーを形成できるようにします。

野生型株の生存可能なカウントがセルロース欠乏変異株と比較して高いことは、セルロース繊維が根表面への細菌の付着を促進する重要な役割を浮き彫りにしています。

砂で育てられた植物に生存可能な細菌の数を把握するには、まず容器の上下の密封材を取り除きます。

容器を滅菌紙の上に置き、砂をほぐすために容器を優しく表面に叩きつけてから、植物と一緒に砂を容器から優しく持ち上げます。

砂の円筒と植物が紙の上に自由になったら、砂を真ん中から割って植物の根が現れます。必要に応じて、容器の縁や根元付近から砂のサンプルを採取してください。これは細菌の拡散、蓄積、増殖を判断するのに役立つ場合があります。

根を持ち上げ、砂や細菌をゆるく付着した砂や細菌を取り除き、適量の水やバッファーに浸して優しく振ってください。適切な培地(例えばルリア寒天)にプレートすることで、得られた懸濁液中の細菌の生存細胞数を決定します。これは根にゆるく結びついている細菌の数を表しています。最後に、超音波検査で密に結合した細菌を除去し、その数を決定します。