マウス心臓組織切片における細菌充填微細病変の免疫染色による画像診断

まず、病原性細菌である 肺炎球菌に感染したマウスの化学的に固定された心臓組織の切片を収めたスライドから始めます。

この感染症により、心筋内に細菌で満たされた微小病変が形成されます。

残留した固定剤を取り除くために、バッファーで部分を洗い流してください。

非イオン性洗剤を塗布して宿主細胞膜を透過させます。

残った洗剤を取り除くためにもう一度洗いましょう。

切断をブロッキング剤で培養し、非特異的な結合部位を阻害します。

未結合のブロッキング剤を取り除くためにすすぎます。

細菌の被膜多糖体に結合する一次抗体を導入します。

未結合抗体を除去するために洗浄し、その後、一次抗体に結合する緑色の蛍光色標識付き二次抗体を加えます。

核染料でカウンターステインして宿主細胞核を標識します。

セクションを洗い、取り付け用材を使って取り付けます。

共焦点顕微鏡を用いて、微小病変内の標識細菌を観察します。

正に帯電したガラススライドに5ミクロンの心臓切片を使い、まず切片を冷凍し、その後解凍して自然乾燥させます。スライドを10%中性のバッファーホルマリンで25度の温度で10分間固定します。その後、固定剤を3回洗い、1回の洗濯につきPBSで5分間取り除きます。

続いて、PBS中の0.2%トリトンX-100で15分間組織を透過します。洗剤はさらに3回、PBSで洗い流します。その後、PBSに10%ヤギ血清を1時間ブロックします。PBSで洗浄した後、37度の状態で2時間、抗血清で切面を覆います。陰性対照には素朴なウサギ抗血清で治療してください。

心臓組織はXI免疫蛍光染色を容易に吸収しやすく、背景レベルが高いため、異なるタイプの抗体の培養期間中の濃度を最適化する必要があると考えられます。

2時間後、PBSで抗血清を洗い流します。その後、溶液を二次抗体に置き換え、スライドを37度の温度でさらに30分間インキュベークします。次に、DAPIを1ミリリットルあたり5ミリグラムで塗布し、PBSでスライドを洗います。最後に、スライドをFluorSaveにマウントし、共焦点顕微鏡で画像化します。