感染研究のためのマウス脾臓における細菌負荷の評価

まずは病原性細菌に感染させたマウスの脾臓から始めます。

細菌の生存能力を保つために、脾臓を冷たいリン酸塩緩衝生理食塩水に入れてください。

均質化装置を用いて脾臓を均質化し、機械的に破壊して細胞内細菌をバッファーに放出します。

これにより、脾臓内の細菌負荷を反映した細菌の懸濁液が生成されます。

正確な細菌数決定のために、溶液中の細菌密度を低減するために均質酸塩を連続希釈します。

次に、2つのセクションに分けた栄養寒天培地を用意します。

同じ細菌希釈液を寒天プレートの各セクションにプレートし、複製を生成します。

皿を乾かしてから逆さまにして孵化します。培養中、生存可能な細菌は増殖し、それぞれ異なるコロニーを形成します。

プレートの各セクションのコロニー数を数えて、感染時の脾臓内の細菌量を表す平均コロニー形成単位(CFU)を計算します。

脾臓は15ミリリットルのチューブに入り、PBSが2ミリリットル入っています。次に、サンプルごとに使い捨ての均質剤を使い、組織を氷上でマセレーションし、その後組織スラリーを連続希釈します。

希釈液を1枚のTSAプレートの別々の面に分けて塗り、サンプルを短時間乾燥させます。その後、プレートを逆さまにし、静止した37度のインキュベーターで一晩培養し、翌朝の両面と各希釈から細菌コロニーを平均します。