感染マウスの腸組織におけるアミノ酸代謝物の可視化

大腸の一部分である盲腸から組織クリオセクシングを採取します。1つは クロストリジオイデス・ディフィシルのみに感染したマウスの断片です。もう1つは C. difficile と Enterococcus faecalisに共感染したマウスからのものです。

共感染組織では、 E. faecalis は宿主アルギニンを代謝し、オルニチンを放出します。 C. difficile はこのオルニチンを吸収し、成長に伴う毒素の産生と組織損傷を促進します。

これらの試料をMALDIイメージングで解析するには、均一なマトリックス溶液層を適用します。

スライドをMALDI質量分析計に搭載し、レーザーで組織をスキャンし、アミノ酸をマトリックスを通してイオン化します。

スライドをMALDI質量分析計に搭載し、レーザーで組織をスキャンし、アミノ酸をマトリックスを通してイオン化します。

得られたイオンは質量と電荷比で分離され、装置によって検出されてアミノ酸分布の空間マップが作成されます。

共感染組織は単一感染サンプルよりもアルギニン濃度が低く、オルニチンレベルが高いため、微生物の協力駆動型 C. difficile の病因を支持します。

先に示したMALDIマトリックス適用およびMALDIイメージング質量分析を行います。

複数の生物複製のイオン画像を解析し、SCiLS統計ソフトウェアを用いて強度ボックスプロット比較で有意性を比較します。