in vitro細菌バイオフィルム形成のためのチャンバー付きカバーグラス法

栄養豊富な培地で培養したバイオフィルム形成細菌の培養を考えてみましょう。

培養液を新鮮な培地で希釈し、振って培養して細菌の増殖を促進し、所望の濃度に達するまで続けます。

次に、嚢胞性線維症患者由来の喀痰ろ過液を豊富に添加した新鮮培地に加えます。

これらのろ過液には宿主由来因子が含まれており、細菌をバイオフィルム形成に備えます。

準備済み懸濁液をチャンバー付きカバーガラスのウェルに分散し、細菌がガラス表面に付着するのを静的に培養します。

培養後、培地を取り除き、新しい培地でウェルを優しくすすいで非付着菌を除去します。

スピュウムろ過液を含む新鮮な培地をウェルに加え、再び静的培養室を行います。

インキュベーション中、培地中の宿主由来因子が細菌シグナル伝達経路を活性化し、細胞外マトリックスの生成を促し、構造化されたバイオフィルムの発生を促進します。

バイオフィルムはさらなる分析の準備が整いました。

事前に準備された培養物40マイクロリットルを新鮮なルリアブロス(LB培地)4ミリリットルに入れ、細菌を培養して600ナノメートルで光学密度0.55の培養物を得る。

次に、0.5 ODの培養液100マイクロリットルをLBで400マイクロリットルの10%痰ろ過液に希釈します。希釈液200マイクロリットルを使ってスライドチャンバーのウェルにシードします。

細菌は37度の環境で4時間、振動せずに付着させてください。

4時間後、培地を取り除き、バイオフィルムを1倍の新鮮LBで優しく洗い流します。残りの培地を200マイクロリットルの新鮮LBに置き換えます。バイオフィルムは揺れずに37度で成長させます。バイオフィルムが顕微鏡検査に使える状態になるまで、洗わずに12時間ごとに培地を交換してください。