細菌性肺感染症の確立のためのマウス口咽頭吸引モデルの準備

まずは固定した麻酔マウスから始めましょう。優しく舌を引き、口の後ろにある口咽頭(オロフリンクス)を露出させます。

少量の細菌の懸濁液を口咽頭に注入します。

液体は口咽頭に残り、呼吸反射を引き起こします。

この反射は口咽頭誤嚥を引き起こし、細菌を気管から肺へと引き込みます。

細菌は小さな気道や肺胞に到達し、そこで増殖して肺組織の上皮内膜に付着します。

これにより、常駐マクロファージが活性化され、好中球をリクルートするシグナル伝達分子の放出が促されます。これらの好中球はサイトカインを放出し、炎症を引き起こします。

マウスをケージに戻して様子を見てください。

ネズミが安楽死した後は、気管と周囲の血管を切り開いて肺を取り除きます。

肺を組織凍結培地に埋め込み、細菌感染した肺組織のさらなる解析のために凍結します。

マウスに接種するには、最初の麻酔された動物を上切歯で強く細い紐に吊るします。操作面の上の固定物に固定し、マウスの体長の約2倍の高さに固定します。滅菌の鈍頭鉗子を使って舌を優しく引き抜き、その舌を無菌で手袋をした指に移して口咽頭へのアクセスを確保します。マイクロピペットのプランジャーを最初のストップまで押し込み、50マイクロリットルの接種点を口咽頭に注入し、ネズミが反射吸引によって細菌の懸濁液を吸い込むまで続けます。

接種剤が口咽頭に挿入されるとマウスは数秒間呼吸を停止し、最終的に反射的誤嚥によって細菌の懸濁液が吸入されます。これは液体が肺に入る際の特徴的なパチパチという音で示されます。

その後、動物をケージに戻し、監視しながら完全に横たわるまで戻します。適切な実験的エンドポイントで、気管、肺動脈、肺静脈を切断し、肺組織を摘出できるようにします。

疾患進行の組織病理学的解析のために、肺を標本型に入れ、最適な切断温度の化合物を型に充填し、組織が完全に浸かるまでします。その後、サンプルをマイナス80度で凍結し、区画と分析を行います。