光感作前駆体を用いた細菌バイオフィルムの光活性処理

まず、病原性細菌のバイオフィルムを含むマイクロプレートウェルから始め、4つの実験グループに分けます。

培地を優しく吸引し、バッファーで洗浄して非接着細胞を除去します。

光感光前駆体を含むバッファーを2基に加え、残りの2基にはバッファーのみを供給します。

すべての基を暗闇で培養し、前駆体がバイオフィルムを拡散し、細菌細胞に入り、細胞質や膜内に蓄積される光感作剤に代謝されます。

インキュベーション後、前駆体処理基1基とバッファーのみ基1基を光照射します。

前駆体処理基では、光が光感作剤を励起し、分子酸素にエネルギーを伝達して活性酸素(ROS)を生成します。

ROSは膜を破壊し、タンパク質やDNAを分解し、細菌細胞の死を引き起こします。

他の3つの条件では、前駆体か光が存在しないためROSは生成できず、バイオフィルムには影響がありません。

96ウェルプレートでバイオフィルムを生成するには、まず30度の溶けた 黄色ブドウ球 菌(米国)を300度のバイオフィルムで接種し、14ミリリットルの丸底チューブに5ミリリットルのトリプトン大豆ブロス(TSB)を含み、37度のインキュベーターで臨床株培養を1晩振る。培養液が定常段階に達したら、細菌細胞を遠心分離し、ペレットとPBSを1ミリリットルあたり2×10の9番目のコロニー形成単位に再懸浮させます。これらの細菌懸濁液を1対200の比率で希釈し、TSB培地に0.5%のグルコースを添加し、ポリスチレン細胞培養の96ウェルマイクロプレートで1井戸あたり200マイクロリットルの細菌細胞を3つのウェルにシードし、37度摂氏の24時間の培養にかけて酸素とともに24時間培養します。 震えずに。

翌日は、バイオフィルムを乱さずにPBSでウェルを優しく3回洗います。次に、適切な実験井戸に新たに調製したALAを200マイクロリットル追加し、プレートを25度Cで光から1時間遮蔽して置きます。次に、100ミリワット毎平方センチメートルの光強で発光ダイオードを1時間照射します。