0 閲覧数 • 3:15 分 • March 31st, 2026
まず大きなガラススライドから始め、両端に小さなガラススライドを二重に配置します。
溶けたアガロースをその空間に注ぎ、さらに大きなガラススライドで覆う。
アガロースを固めるために冷やしてください。
ガラススライドを取り出し、アガロースを小さなパッド状に切り分けます。
アガロースパッドをスライドに取り付けた接着フレームに入れます。
病原性細菌の培養を取りましょう。これは宿主感染に不可欠な蛍光色標識分泌系を発現するように遺伝子組み換えされています。
密度の高いバクテリアパッチを使い、水に浸しておいてください。
渦を使って細菌を均一に拡散させる。
アガロースパッドに懸濁液を当てて細菌を固定します。
水分補給のためにカバースリップで密閉してください。
明視野照明の下で、画像用のセルフィールドを選択します。
顕微鏡の設定を最適化して光漂白を減らし、信号感度を高めましょう。
蛍光タグ付けされた細菌を検出するために蛍光チャンネルに切り替えます。
まずは生細胞イメージング用のアガロースパッドを作りましょう。約30ミリリットルの1%低溶度アガロース溶液を水に淹れ、ガラスフラスコで電子レンジで約90秒間加熱し、時折回してアガロースが完全に溶けるまで加熱します。
25×75×1.1ミリのガラススライドの端に2枚、2枚重ねて2枚、2枚×22×22×0.15ミリメートルのガラススライドを置きます。次に、もう一方の端に小さなスライドを2枚積み重ねます。溶融アガロースを約1ミリリットルのピペットで中央スライドに注ぎ、上部の2枚のガラススライドの間にもう一枚大きなスライドを置き、気泡の発生を避けます。
スライドを4度で15分間冷やし、その後メスやカミソリの刃でパッドを優しく小さな四角に切ります。25×75×1.1ミリのガラススライドに両面接着フレームを固定し、スライドに複数のパッドを置きます。レジ オネラ・ニューモフィラ の重いパッチを1ミリリットルの二重蒸留水に溶かします。
次にボルテックスをかけ、2〜3マイクロリットルの希釈液をパッドにピペットで注ぎます。58×24×0.15mmのカバースリップを接着フレームの上に優しく置きます。明視野照明を用いたイメージング用セルを選択します。
次に、顕微鏡のソフトウェアのキャプチャウィンドウでNDを180に、ビニングを2×2に調整します。488ナノメートルチャネルを用いてサンプルを500〜1000ミリ秒露光し、同じパラメータでタグのない レジオネラ肺炎菌 を画像化して蛍光の特異性を検証します。