Name: 親油性色素を組み合わせることで、その場でハイブリダイゼーション、免疫組織化学、および組織学 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 5 s
Description: 学ぶ マウス組織における親油性色素注入、in situハイブリダイゼーション、免疫組織化学、組織学的セクションを組み合わせた手法。単一検体から形態と遺伝子・タンパク質発現を相関させ、神経科学と遺伝学の研究に有用です。

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共焦点画像は、イメージングのためのアイオワカーバーセンターの大学で得られた。資金は、BFにNIDCD（5R01DC00559007）によって提供されていたこのプロジェクトのためのマウスを飼育するためのBF追加サポートするSBIR助成金（MH079805）によって提供されていました

<ol><li>Jensen-Smith, H., Gray, B., Muirhead, K., Ohlsson-Wilhelm, B., Fritzsch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-distance+three-color+neuronal+tracing+in+fixed+tissue+using+NeuroVue+dyes%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Invest%22%5BJournal%5D)">Long-distance three-color neuronal tracing in fixed tissue using NeuroVue dyes.</a> Immunol Invest. 36, 763-789 (2007).</li>
<li>Tonniges, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photo-+and+bio-physical+characterization+of+novel+violet+and+near-infrared+lipophilic+fluorophores+for+neuronal+tracing%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microscopy%22%5BJournal%5D)">Photo- and bio-physical characterization of novel violet and near-infrared lipophilic fluorophores for neuronal tracing.</a> Journal of Microscopy. , (2010).</li>
<li>Bartheld, C. S. von, Cunningham, D. E., Rubel, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+tracing+with+DiI%3A+decalcification%2C+cryosectioning%2C+and+photoconversion+for+light+and+electron+microscopic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Neuronal tracing with DiI: decalcification, cryosectioning, and photoconversion for light and electron microscopic analysis.</a> J Histochem Cytochem. 38, 725-733 (1990).</li>
<li>Gurung, B., Fritzsch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+embryonic+midbrain+thalamic+and+thalamic+auditory+connection+development+in+mice+as+revealed+by+carbocyannine+dye+injection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Time course of embryonic midbrain thalamic and thalamic auditory connection development in mice as revealed by carbocyannine dye injection.</a> J Comp Neurol. 479, 309-327 (2004).</li>
<li>Fritzsch, B., Nichols, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DiI+reveals+a+prenatal+arrival+of+efferents+at+the+differentiating+otocyst+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hear+Res%22%5BJournal%5D)">DiI reveals a prenatal arrival of efferents at the differentiating otocyst of mice.</a> Hear Res. 65, 51-60 (1993).</li>
<li>Jahan, I., Kersigo, J., Pan, N., Fritzsch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurod1+suppresses+hair+cell+differentiation+in+ear+ganglia+and+regulates+hair+cell+subtype+development+in+the+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+ONE%22%5BJournal%5D)">Neurod1 suppresses hair cell differentiation in ear ganglia and regulates hair cell subtype development in the cochlea.</a> PloS ONE. 5, e11661-e11661 (2010).</li>
</ol>

マウスの組織は、アイオワ州動物実験の大学が定めるガイドラインと規則に従って収集され、委員会（ACURF 0804066）を使用していた。

このビデオでは、我々は与えられた動物（図3）内のデータを相関させることにより、データの収集と結束力を最大限にするために4つの技法を組み合わせる方法を示しています。このアプローチは、このように共局在し、変異の相関効果に関する情報を改善しながら、パブリッシュデータを取得するために必要な時間を繁殖量を減らすこととなります。マウス胎児はこのビデオ、成体マウスだけでなく、ニワトリ、アフリカツメガエル、ゼブラフィッシュのような他の動物に利用されたが、同様にこれらの技法を用いて分析することができます。他の種を使用する場合はプロテイナーゼK消化を変更する必要があります。ここでは、特に関心の三神経集団にまでラベルを付けるために、異なる蛍光NeuroVueの染料を使用してください。これらの染料の利点は、単に免疫組織化学に依存する場合に問題となる可能性がある、それらが変異マウスで使用できることであるまたは解析の対象となる変異の影響を受け、そして彼らが逆行し、順行性に5ニューロンをラベルにすることができない場合がありますこと。最近の研究はまた、6 2に同時に標識することができるニューロン集団の数を増加している。後、興味の同じ組織を追跡する親油性染料は、遺伝子転写の解析のために、in situハイブリダイゼーションに使用して分析することができますし、その後タンパク質の分布の免疫組織化学を用いて分析することができます。後者の分析は、表現型の特性6に追加できる詳細な組織学で補完することができます。この多因子解析では、そうでない場合は、より広範なプロトコルとマウスの繁殖の必要性にありえないか、少なくとも可能性がある、同じ動物内で相関分析を通じて新たな洞察を得る可能性を秘めています。

<table><tbody><tr><td>&lt;em&gt;in situ&lt;/em&gt; ハイブリダイゼーション：</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PC DIG洗浄・ブロッキングバッファーセット</td><td>Roche Group</td><td>1585762</td><td></td></tr><tr><td>Premix 20x SSCバッファー</td><td>Roche Group</td><td>1666681</td><td></td></tr><tr><td>Proteinase K 20mg/ml</td><td>Ambion</td><td>AM2546</td><td></td></tr><tr><td>ジエチルピロカルボネート (DEPC)</td><td>Research Products International Corp.</td><td>D43060</td><td></td></tr><tr><td>ホルムアミド</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F9037</td><td></td></tr><tr><td>デキストラン硫酸</td><td>Research Products International Corp.</td><td>D20020</td><td></td></tr><tr><td>BM Purple</td><td>Roche Group</td><td>11442074001</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Dig-AP Fabフラグメント</td><td>Roche Group</td><td>11093274910</td><td></td></tr><tr><td>RNase A酵素 10mg/ml</td><td>Fermentas</td><td>EN0531</td><td></td></tr><tr><td>RNase Away</td><td>Research Products International Corp.</td><td>7003</td><td></td></tr><tr><td>サケ精子DNA 10mg/ml</td><td>Invitrogen</td><td>15632-011</td><td></td></tr><tr><td>Stericup フィルターユニット 0.22&amp;mu;m; 500ml</td><td>EMD Millipore</td><td>SCGVU05RE</td><td></td></tr><tr><td>フィルターディスク 0.2&amp;mu;m; 25mm</td><td>Whatman, GE Healthcare</td><td>6780-2502</td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水 pH 7.4 パケット</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-5368</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;免疫組織化学：&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ヤギ血清</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G9023</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8532</td><td></td></tr><tr><td>H&amp;#8211;chst染料</td><td>Polysciences, Inc.</td><td>9460</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;組織学：&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Poly/Bed 812 包埋剤/DMP-30 キット</td><td>Polysciences, Inc.</td><td>08792-1</td><td></td></tr><tr><td>プロピレンオキシド</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>110205</td><td></td></tr><tr><td>グルタルアルデヒド溶液 50%</td><td>Fisher Scientific</td><td>G151</td><td></td></tr><tr><td>DPX封入剤</td><td>Fluka</td><td>44581</td><td></td></tr><tr><td>ロッカミックス</td><td>MidSci</td><td>55D1114</td><td></td></tr><tr><td>ドライバス</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-715-125D</td><td></td></tr><tr><td>ローテーター</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>400110Q</td><td></td></tr><tr><td>インキュベーター (60&amp;#x00B0;に設定)</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-690-625D</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;トレーサー染料法：&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>マイクロシザース</td><td>Geuder</td><td>G-19775</td><td></td></tr><tr><td>精密ピンセット</td><td>E.M.S</td><td>72680-F</td><td></td></tr><tr><td>NeuroVue染料：Maroon, Red, Jade</td><td>MTTI</td><td>FS-100(1,2,6)</td><td></td></tr><tr><td>1X リン酸緩衝生理食塩水 (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-5368</td><td></td></tr><tr><td>解剖用顕微鏡</td><td>Leica Microsystems</td><td>M205 FA</td><td></td></tr><tr><td>インキュベーター (36&amp;#x00B0;に設定)</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-690-506DQ</td><td></td></tr><tr><td>共焦点顕微鏡</td><td>Leica Microsystems</td><td>LSM 510</td><td></td></tr><tr><td>スライドガラス</td><td>Surgipath</td><td>00240</td><td></td></tr><tr><td>カバーガラス</td><td>Surgipath</td><td>00106</td><td></td></tr><tr><td>RPI</td><td>グリセロール</td><td>G22025-0.5</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド (4% および 0.4%)</td><td>Fisher Scientific</td><td>T353-500</td><td></td></tr></tbody></table>

親油性色素を組み合わせることで、その場でハイブリダイゼーション、免疫組織化学、および組織学

Combining Lipophilic dye, in situ Hybridization, Immunohistochemistry, and Histology

遺伝子調節ネットワークに深くカットする単一の遺伝子の機能を越えて、単一の動物に結合された複数の変異が必要です。 2つ以上の遺伝子のような分析は、細胞および組織発現の変化の詳細な解決のための全体のマウントされている発展途上の臓器またはセクションの両方で、他の遺伝子、またはそれらのタンパク質の免疫組織のin situハイブリダイゼーションで補完する必要があります。複数の遺伝子変異を組み合わせることで、条件付きで遺伝子を削除し、胎生致死を回避するために、CREまたはflipaseを使用する必要があります。必要な繁殖方式は、劇的に努力を強化し、所望の遺伝子改変の全レパートリーを持つ、非常に少数の動物の結果と、変異遺伝子の数に比例するコスト。複数の変異を運んでいるこれらのいくつかの貴重な標本を得るための労力と時間の膨大な量を償却する組織の最適化が必要となる。また、複数のテクニックを持つ単一の動物を調査することで、より簡単発現プロファイルと遺伝子欠失の欠陥を相関させることができます。我々は、与えられた動物のより徹底的な分析を得るために技術を開発している、すべての全体のマウント臓器やセクションの両方で同一の試料から複数の異なる組織学的に認識可能な構造だけでなく、遺伝子と蛋白質発現を分析する能力を。マウスは、この手法の有効性を実証するために利用されているが、それは動物の広い配列に適用することができます。これを行うには、トレース、in situハイブリダイゼーション、免疫組織化学、および組織全体のマウントは、データの最大可能量を抽出するために親油性色素を組み合わせる。

マウス組織からのデータ収集を最大にするために異なる技術の組み合わせが提示される。

単一遺伝子の機能解析にとどまらず、遺伝子制御ネットワークをより深く追究するには、単一の個体に複数の変異を組み合わせる必要があります。このような...の解析は、

単一遺伝子の機能を超えて遺伝子制御ネットワークを解析するには、単一の個体における複数の変異が必要です。本システムでは、遺伝的変異を形態学的および発現プロファイルと相関させるため、単一組織から得られるデータ量を最適化します。これは、まず、いくつかの個別の神経細胞集団を可視化するために親油性色素を注入することによって達成されます。遺伝子転写物の空間的・時間的パターンを可視化するために、in situ ハイブリダイゼーションが行われます。免疫組織化学がタンパク質発現の特異的なパターンを反映する一方で、組織切片作成という次元が加わることで、表現型の特性評価に寄与します。この実験系により、同一の検体から、ホールマウント標本および切片標本の両方を用いて、組織学的に識別可能な複数の異なる構造に加えて、遺伝子およびタンパク質の発現を分析することが可能になります。これは、親油性染料によるトレーシングとin situ ハイブリダイゼーション、免疫組織化学、および組織学を組み合わせたシステムです。この手法では、すべての組織解剖および操作において、形態学的な特徴と遺伝子およびタンパク質の発現を相関させることで、単一の検体から得られる情報を最大限に活用します。動物は、適切なサイズの針を備えたペリスタルティックポンプを用い、0.1 molar リン酸緩衝液中の 4%パラアルデヒドで経心腔灌流固定します。DYは光感受性であるため、暗い密閉容器に保管し、また、交差汚染を避けるため、解剖顕微鏡下で各染料を扱う際は専用の器具セットを使用してください。検討対象となるニューロン集団を選択的に標識し、他の不要な構造を標識しないための色素塗布部位を決定します。選択した部位を視覚的に確認し、色素を配置できるように、不要な組織を除去します。次に、あらかじめロードされたニューロビュー色素フィルターストリップを、マイクロ鋏で適切なサイズの三角形にカットします。脳などの軟組織に直接挿入する場合、他の構造物にラベル付けされるのを避けるため、できるだけ小さく切り出すようにしてください。フィルターの三角形の頂点を利用して組織を貫通させ、フィルターを挿入します。より硬い組織の場合は、切開を入れてから挿入しやすくしてください。解剖針を使用してフィルターを組織に押し込まないでください。検体を4%パラホルムアルデヒドを入れた密閉バイアルに入れ、年齢および染料の拡散距離に応じて、暗所で36 °Cで2〜14日間インキュベートします。落射蛍光を備えた解剖顕微鏡を用いて、染料が目的の部位まで拡散したことを確認し、目的の組織を切り出します。共焦点顕微鏡で撮影するため、グリセロールを用いて検体をスライドガラス上にホールドマウントします。共焦点顕微鏡で親油性標本のイメージングを行った後、サンプルをRNaseフリーのPBSが入った2 mLのRNaseフリーエッペンドルフチューブに移し、グリセロールを系統的に洗い流します。4 °Cで、段階的なメタノール系列を用いてサンプルの脱水および再水和処理を行います。まず100%メタノールで1時間以上インキュベートし、最終的に25%メタノールで15分間処理します。1倍PBSで5分間、3回洗浄します。2 mLの新鮮なPBSに20 mg/mLのプロテイナーゼKストック溶液を2 µL加え、組織を消化します。組織の不透明度が不透明からほぼ透明に変化することを確認し、消化反応をモニターします。酵素消化を停止させるため、サンプルを4%パラホルムアルデヒドで5分間インキュベートします。次に、PBSで1分間1回洗浄し、続いて5分間の洗浄を3回行います。ハイブリダイゼーション前の前処理ステップとして、最後のPBS洗浄液を可能な限り完全に取り除いて廃棄してください。1.8 mLのハイブリダイゼーション溶液中でサンプルをインキュベートします。インバーターを用いて60 °Cで1時間混合します。サモン精子DNAを85 °Cで10分間インキュベートして変性させ、氷上に置きます。変性させた一本鎖DNA 200 µLとDIG標識リボプローブ約100 ngを各サンプルに加え、ハイブリダイゼーションオーブンを用いて60 °Cで一晩ハイブリダイゼーションを行います。ハイブリダイゼーションオーブンを用いて、60 °Cで2×SSCによる10分間の洗浄を3回行い、サンプルを処理します。重要な点として、ISO tempヒートブロックを用いて70 °Cで60分間、2×SSCで洗浄し、内因性アルカリホスファターゼ活性を除去してください。その後、PBSで5分間サンプルを洗浄します。次にPBSを除去し、10 mg/mLのRNAse Aを1 µL添加します。その後、ISO tempヒートブロックを用いて37 °Cで60分間インキュベートします。PBSおよびRNAse Aを廃棄し、洗浄液で1回10分間、計3回の洗浄を行います。最後に、ISO温度ヒートブロックを用いて70 °Cで60分間インキュベートし、残っているRNAを加熱し活性化させます。最終ステップは、リボプローブを可視化することです。サンプルを1倍のブロッキングバッファー中で1時間インキュベートします。ブロッキングバッファーを捨て、1 µLのanti ditch抗体を含むブロッキングバッファー2 mLを各サンプルに加えます。一晩インキュベートした後、指示通りに1×洗浄バッファーで数回洗浄します。その後、サンプルを1×洗浄バッファー中で一晩インキュベートします。サンプルを検出バッファーで10分間1回洗浄し、ウェルプレートにサンプルを移します。バッファーを除去し、BM purpleを用いて呈色させます。BM purpleは光感受性があるため、目的の信号強度が得られたら、アルミホイルまたはボックスで覆ってください。ウェル内で検出バッファーを用いてサンプルを5分間1回洗浄します。透過顕微鏡でサンプルを撮影するか、4%パラホルムアルデヒド中で4°Cで保存します。必要に応じて、段階的なエタノール系列を用いて組織から親油性染料を除去します。次に、5～10分かけてPBSを段階的に加え、組織を再水和させます。続いて、2.5%正常ヤギ血清および0.5%Triton X 100を用い、室温のシェーカー上で1時間、組織をブロッキングします。ブロッキング溶液で希釈した一次抗体とともに、4°Cのシェーカー上で48時間インキュベートします。PBSで1時間ずつ3回洗浄し、再度サンプルをブロッキングします。その後、ブロッキング溶液で希釈した蛍光標識二次抗体とともに、4°Cのシェーカー上で12～24時間インキュベートします。二次抗体は光感受性であるため、これ以降はサンプルに光が当たらないよう注意してください。再度、サンプルをPBSで1時間ずつ3回洗浄します。最後に、落射蛍光顕微鏡および共焦点顕微鏡を用いて検体をイメージング分析します。エポキシ樹脂への包埋および切片作成には、通常、ガラス製サンプルバイアル内で0.1 Mリン酸緩衝液に含まれる2.5%GLUTARALDEHYDEおよび1%PFAを用いて組織を一夜固定する必要があります。その後、段階的なエタノール処理により組織を脱水させ、溶媒へと移行させます。まず、絶対エタノールとプロピレンオキシドの1:1混合液で5分間インキュベートし、続いてプロピレンオキシドのみで10分間の洗浄を5回行います。最後に、プロピレンオキシドと樹脂の1:1混合液中でシェーカーを用いて一夜インキュベートし、サンプルに樹脂を浸透させます。サンプルを含む溶液を平坦な包埋モールドに注ぎ、プロピレンオキシドを揮発させるため、ベンチ上に4〜6時間放置します。その後、サンプルを最終モールドに移し、100%樹脂中で4時間置換します。サンプルを樹脂で包埋し、ラベルを貼付します。60 °Cで24〜48時間インキュベートし、樹脂を重合させます。余分な樹脂を最小限に抑えるため、必要に応じてカミソリで樹脂ブロックを削ります。ウルトラミクロトームを用いて操作を行います。1〜2 µmの連続切片を作成してマウントし、透過光およびエピ蛍光顕微鏡を用いてサンプルの撮像を行います。異なる波長の親油性染料を用いることで、3つの異なる脳神経の中枢投射を可視化することが可能です。ここでは、三叉神経、舌咽神経、および迷走神経の末梢部分に親油性染料を注入します。色素拡散のためのインキュベーション後、脳幹に向かう神経の中枢突起を明視野顕微鏡で可視化します。後脳を解剖し平坦にマウントすると、標識した3本の神経の中枢突起の一部に明らかな標識が見られます。明視野顕微鏡に対し、共焦点顕微鏡では特定の部位を照明することで立体的な把握が可能となり、3種類の異なる色素を使用することで、各集団の分布を評価できます。他の方針と比較して、ここではneuro viewを用いて新生マウスの内耳求心性神経を追跡しています。Prox1に対するC2ハイブリダイゼーションを赤色で示し、さらに抗チューブリン抗体と抗Prox1抗体の免疫反応性を組み合わせることで、求心性神経を可視化しています。さらに、厚さ2 µmのエポキシ樹脂切片を用いて、蝸牛を横断面として撮影します。この手順を行う際は、親油性染料の配置を慎重に選択することが重要です。神経解剖学を十分に理解しておくことがこのプロセスに役立ちます。また、すべての光感受性ステップに注意してください。この手順により、交配回数と出版可能なデータの取得に要する時間を削減しつつ、変異体における共局在およびカバー効果に関する情報を向上させることができます。

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神経科学

その場テトラマー染色やin situハイブリダイゼーション（ISTH）で組み合わせる手法は可視化、マッピングおよび分析、そのウイルスに感染したターゲットへのウイルス特異的CD8 +...

同時にウイルス特異的CD8 + T細胞やウイルス感染細胞を可視化するテクニックその場で</em

出典:Jolly, S., et.al.二重蛍光In Situハイブリダイゼーションと免疫標識を組み合わせて、マウス脳切片における3つの遺伝子の発現を検出します。J. Vis. Exp. (2016).このビデオでは、ダブル蛍光in...

マウス脳切片における遺伝子発現を検出するための二重蛍光In Situハイブリダイゼーションの実施

ここでは、ホールマウント蛍光を記述...

ホールマウントRNAを蛍光<em&gt;その場で</emの&gt;ハイブリダイゼーション<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;胚

我々は、色の沈殿物を対照することによって三つの異なるmRNAの分布パターンの同時および特定の検出を可能にする、完全なショウジョウバエの胚におけるマルチターゲット発色性ホールマウントin situハイブリダイゼーション （MC-WISH）の手順を説明します。...

マルチターゲット発色ホールマウント<em&gt;その場で</em&gt;ハイブリダイゼーションにおける遺伝子発現のドメインを比較します<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;胚

特定の細胞タイプへの遺伝子発現の局在化は、特異的な抗体がないために困難な場合があります。ここでは、ダブル蛍光 RNA in situ ハイブリダイゼーションと免疫染色を組み合わせることにより、遺伝子発現を 3...

ダブル蛍光を組み合わせます<em&gt;その場で</em&gt;マウス脳切片の3遺伝子の発現を検出するための免疫標識とのハイブリダイゼーション

記載されている RNAその場で交配のプロトコルでは、全体のショウジョウバエの胚または切り裂かれたティッシュで RNA の検出をことができます。96 ウェル マイクロ...

ショウジョウバエの胚とパスチラミドシグナル信号増幅を利用した生体表面の高解像度蛍光In Situハイブリダイゼーション

ここで多重蛍光免疫組織染色とリンパ腫における複数のがん関連抗原の同時定位のためのイメージング プロトコルについて述べる。このプロトコルは、すべての組織切片内バイオ...

多重蛍光免疫組織化学染色、イメージング、およびリンパ腫の組織学的試料中の分析

凍結組織に対してマルチスペクトルイメージングを行う迅速な染色法について述べます。...

凍結組織切片の多スペクトル蛍光イメージングの迅速な方法

このプロトコルはmultilabel FISHおよび蛍光性のIHC信号を達成することを目標に、新しい凍結および固定マウス頭脳セクションの蛍光性in situ の交配(魚)および蛍光性のimmunohistochemistry...

マルチプレックス蛍光 In Situ ハイブリダイゼーションと蛍光免疫組織化学の融合による新鮮、凍結、または固定マウスの脳切片の結合(英語)

このプロトコルでは、網膜のシナプス回路とタンパク質の局在の探索に焦点を当てて、免疫電子顕微鏡のプレ埋め込みの詳細な手順を概説しています。...

免疫電子顕微鏡のプレ埋め込みによる網膜回路と分子局在の研究

学ぶ マウス組織における親油性色素注入、in situハイブリダイゼーション、免疫組織化学、組織学的セクションを組み合わせた手法。単一検体から形態と遺伝子・タンパク質発現を相関させ、神経科学と遺伝学の研究に有用です。

親油性色素を組み合わせることで、その場でハイブリダイゼーション、免疫組織化学、および組織学

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