0 閲覧数 • 3:03 分 • March 31st, 2026
葉組織に感染できる細菌培養を例に挙げましょう。
コロニーをこそげ落とし、塩溶液に懸浮させます。
細菌濃度を評価するために光学密度を測定し、希望のODまで希釈します。
最終接種濃度に達するために連続希釈を行います。
界面活性剤を加えて表面張力を下げ、葉に均一に細菌が広がるようにしましょう。
懸液をペトリ皿に移してください。
次に、 シロイナズプシス の鉢の上に木の棒を2本置きます。
植物を皿の上に逆さまにして、葉を懸濁液に浸します。
セットアップを真空チャンバーに入れ、真空パルスをかけます
加えられた真空は自然な開口部を通じて葉組織から空気を除去します。
真空を解放すると大気圧が回復し、細菌が葉の中に押し込まれます。
最大の浸透を得るためにパルスを繰り返してください。
鍋を外してください。その後、余分な接種物を拭き取る。
細菌に感染した シロイヌズナの 葉は下流での分析準備が整っています。
対象の Pseudomonas syringae 菌株のグリセロールストックを、マイナス80度の温度から適切な抗生物質を補給したLBプレートにストライニングします。プレートは28度の温度で40〜48時間孵化します。細菌のバイオマスを削り取り、10ミリモラー塩化マグネシウム5ミリリットルに再懸浮させます。
600ナノメートルで光学密度を測定し、10ミリモラの塩化マグネシウムを加えて0.1に調整します。10ミリモラー塩化マグネシウムで連続希釈を行い、最終接種濃度を1ミリリットルあたり5×10の5分の5のCFUにします。次に、 シロイナナズナ 用に200ミリリットルの接種剤、豆の植物用に50ミリリットルの接種剤を準備します。
接種前に界面活性剤Silwet L-77を、豆の接種用に最終濃度0.02%、 シロイナズナ用に0.01%に加えます。 シロイナナズナ の侵入には、鉢の上にX字型の木の棒を2本置き、鉢を下向きにして直径14センチのペトリ皿(200ミリリットルの接種剤を含む)に置きます。豆の葉の接種では、植物と接種液を真空チャンバーに挿入し、葉を接種剤を入れた50ミリリットルの円錐形遠心分離機チューブに注入します。
葉に浸透させるために500ミリバールのパルスを30秒間かけます。余分な接種液を紙で排水し、植物を対応する成長室に戻します。