土壌のないシステムにおける シロイナドプシス・タリアナ 根の細菌定着の監視

まずは、土壌のない液体培地の表面に浮かぶ低密度メッシュの支柱で育てられた シロイナドプシス・タリアナ の苗から始めます。

これらの苗は、根に細菌が入植しバイオフィルムを形成するもので事前に接種されています。

苗を持ったまま、葉の下の茎を鉗子で優しくつまみます。

その後、根を傷つけずに苗を網から持ち上げ、植根した根の構造を保ちます。

苗を二重蒸留水を入れたマルチウェルプレートに移します。

プレートをホイルで覆い、多角ソニックケーターでサンプルを超音波処理してバイオフィルムを破壊し、根表面から細菌を押し出します。

超音波処理後、超音波処理済みの細菌懸濁液を使って連続希釈を準備します。

希釈したサンプルを寒天プレートにプレートし、ガラスビーズを加えて細菌を均等に広げます。

ビーズを取り除き、培養皿を培養して、生存可能な細菌がコロニーを形成できるようにします。

コロニー形成は、土壌のないシステムにおける細菌による根の定着が成功していることを証明します。

すすぎ後は、葉の下に火炎で滅菌された鉗子を優しく置き、苗をメッシュから取り出します。茎を軽くつまみ、苗を網目から離して根を折らずに外すように揺らします。植物の根から細菌を除去するには、各メッシュから苗を24ウェルの超音波検査プレートの個別のウェルに移し、1ミリリットルの二重蒸留水を含みます。

原稿に記載されている多角ソニックケーターを使い、プレート内のすべてのサンプルを一度にソニック処理します。細菌を定量するために、超音波処理されたサンプルを細菌増殖培地で連続的に10倍に希釈します。滅菌ガラスビーズで広げ、細菌に最適な温度で培養し、個々のコロニーがカウント可能になるまで培養します。