成長調節タンパク質のイメージング用シアノバクテリア色素の光漂白

まず、固定され、固定され、透過化されたシアノバクテリア細胞をカバースリップに接着させます。

これらのシアノバクテリア細胞は、低生成量の増殖調節タンパク質を発現します。

高分解能蛍光イメージングでは、シアノバクテリア細胞内の自然な感光色素が背景蛍光を放出します。

これにより、これらの低存在量タンパク質を可視化する際の画質が低下します。

この背景蛍光を最小限に抑えるために、シアノバクテリア細胞を含むカバースリップを染色皿に入れます。

非特異的抗体の結合を防ぐために血清タンパク質を含むブロッキングバッファーを追加し、細胞の透過性を維持する洗剤を添加します。

染色皿を氷の上に置き、細胞を強いキセノン光にさらします。

高強度の光は光漂白を開始し、光に敏感な色素を分解しますが、低濃度の増殖調節タンパク質は影響を受けません。

寒冷な環境は熱による損傷を最小限に抑え、細胞の完全性を保ちます。

このプロセスにより、高分解能蛍光顕微鏡法における免疫染色により、低存在比の成長調節タンパク質を明確に可視化することが可能になります。

洗ったカバースリップをステイン皿に移します。

カバースリップの上部にブロッキングバッファーを50マイクロリットル加えます。染色皿全体を氷の上に置き、キセノン光源の下に移動させて少なくとも60分間光漂白します。フォトブリーチとブロッキングの後、ペーパータオルの端でブロッキングバッファーを取り除きます。