病原体感染ショ ウジョウバエ 血球の高解像度共焦点イメージング

固定された血球を含むスライドを共焦点顕微鏡ステージに置きます。

これらの血球はショ ウジョウバエのメラノガスター 幼虫から得られ、細菌性病原体に感染しています。

血球は緑色の蛍光タンパク質で標識され、核は青色染料で染色され、細菌は可視化のために赤色蛍光タンパク質を発現します。

顕微鏡を構成して、細胞区画と病原体を同時に追跡するために3つの蛍光色体すべてを検出します。

高解像度対物レンズを用いて、ターゲットの血球に焦点を合わせて細胞内の詳細を捉えます。

適切なサンプル露出と信号の鮮明さを最適化するためにレーザー出力と検出器利得を調整します。

複数のZ面をスキャンして露出レベルが適切かどうか確認してください。

上下のZ位置を設定して、血球全体を画像化します。

スキャニングズームを使って目的の血球を分離し、高解像度の3D画像を取得します。

この方法は、血球内の病原体の局在を可視化することを可能にします。

DAPI、EGFP、mCherryの三色イメージング用に共焦点顕微鏡を構成します。

試料を顕微鏡に置き、63X/1.4の数値絞り対物レンズを使って試料にピントを合わせます。画像撮影のために視野内に望ましい血球を位置づけます。その後、レーザー出力と検出器の利得を調整し、試料の適切な露出を実現します。

複数のZ面を確認し、試料厚全体で露光レベルが適切かどうか確認してください。次に、全血球のZ軸上の上下位置を見つけます。これらの位置をZセクションの開始と終了位置として設定します。

スキャニングズームを使って、血球を含む部分を画像化します。X-Y平面の1024×1024ピクセル、Z次元で0.3マイクロメートルの間隔など、適切な解像度で画像系列を収集します。