Name: Nanoformulated抗レトロウイルス薬の血液媒介マクロファージのキャリッジのための方法の開発 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 46 s
Description: 学ぶナノ粒子化抗レトロウイルス薬の製造法とマクロファージによる取り込み・保持・放出メカニズム。ウェットミリングやホモジナイゼーションを用いて結晶性ナノ粒子を作製し、ヒト単球由来マクロファージでの細胞内動態と抗HIV効果を評価する。

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作品は、国立衛生研究所からの補助金1P01DA028555 - 01A1、2R01 NS034239、2R37 NS36126、NS31492 P01、P20RR 15635、P01MH64570、およびP01 NS43985（HEGへ）によってサポートされていました。著者は、原稿と卓越したグラフィックと文学的支援の重要な読書のために氏ロビンテイラーに感謝。我々は彼の湿式粉砕の専門知識のためにスティーブGrzelakに感謝します。我々はまた、スキャンおよび透過型電子顕微鏡像を供給するためのネブラスカ大学リンカーン電子顕微鏡の中核施設の大学の博士漢チェンに感謝したいと思います。最後に、我々は、ライブ共焦点顕微鏡を使用して彼女の専門知識についてはミーガンMarquartに感謝します。

<ol><li>Gendelman, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+isolation+and+propagation+of+human+immunodeficiency+virus+on+recombinant+colony-stimulating+factor+1-treated+monocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Efficient isolation and propagation of human immunodeficiency virus on recombinant colony-stimulating factor 1-treated monocytes.</a> J Exp Med. 167 (4), 1428-1441 (1988).</li>
<li>Dou, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+macrophage-based+nanoparticle+platform+for+antiretroviral+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Development of a macrophage-based nanoparticle platform for antiretroviral drug delivery.</a> Blood. 108 (8), 2827-2835 (2006).</li>
<li>Dou, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+investigations+for+the+morphologic%2C+pharmacokinetic%2C+and+anti-retroviral+properties+of+indinavir+nanoparticles+in+human+monocyte-derived+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Laboratory investigations for the morphologic, pharmacokinetic, and anti-retroviral properties of indinavir nanoparticles in human monocyte-derived macrophages.</a> Virology. 358, 148-158 (2007).</li>
<li>Dou, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+delivery+of+nanoformulated+antiretroviral+drug+to+the+brain+in+a+murine+model+of+neuroAIDS%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Macrophage delivery of nanoformulated antiretroviral drug to the brain in a murine model of neuroAIDS.</a> J Immunol. 183 (1), 661-669 (2009).</li>
<li>Nowacek, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoformulated+Antiretroviral+Drug+Combinations+Extend+Drug+Release+and+Antiretroviral+Responses+in+HIV-1-Infected+Macrophages%3A+Implications+for+NeuroAIDS+Therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmune+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Nanoformulated Antiretroviral Drug Combinations Extend Drug Release and Antiretroviral Responses in HIV-1-Infected Macrophages: Implications for NeuroAIDS Therapeutics.</a> J Neuroimmune Pharmacol. , (2010).</li>
<li>Nowacek, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NanoART+synthesis%2C+characterization%2C+uptake%2C+release+and+toxicology+for+human+monocyte-macrophage+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomed%22%5BJournal%5D)">NanoART synthesis, characterization, uptake, release and toxicology for human monocyte-macrophage drug delivery.</a> Nanomed. 4 (8), 903-917 (2009).</li>
<li>Kalter, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+HIV+replication+in+macrophage+colony-stimulating+factor-treated+monocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Enhanced HIV replication in macrophage colony-stimulating factor-treated monocytes.</a> J Immunol. 146 (1), 298-306 (1991).</li>
</ol>

利害の衝突は宣言されません。

NanoARTは、HIV - 1治療を改善するために設計されています。我々は、臨床使用のためとnanoformulated医薬品開発のための臨床検査システムなどの技術を開発する最初のステップとして、単球 - マクロファージ系薬物送達システムを提案している。私たちの過去の作品は、システムがそのようなアプリケーション5,6に対して利用可能であることを示している。 現在のレポートでは、我々は一般的に使用されるHIV - 1薬（; ritonovir、RTV、エファビレンツ、EFVとアタザナビル、ATVインジナビル、IDV）のNPの合成方法を説明しました。これは、湿式粉砕、均質化、超音波によって達成された。重要なことは、我々のアプローチは大きさ、形状や電荷5,6などnanoART物理的特性の変更が可能。界面活性剤を慎重に選択することによって、人は非常に肯定的に中立的に非常に負の粒子の電荷を制御することができます。処理時間と強度を変えることによって、一つのサイズを制御し、≥3μmのと同じくらい≤200nm以下のような小さなまたは大きな粒子をレンダリングすることができます。粒子の形状はまた、他の物理的な特性よりも少ない程度に、制御することができます。多面的幾何学的図形が湿式粉砕または均質化を経て製造することができますが、例えば、球状粒子は、ポリマーと超音波処理によって作ることができます。湿式粉砕し、均質化は、形状の異なる粒子を産生するが、このプロセスは、分画法に依存し、直接に制御することができます。製造方法のこれらのプロパティは、研究が簡単に正確な設計仕様にnanoARTを生成できるようにすることができます。 nanoARTの物理化学的性質は、それらの安定性とどのように細胞と相互作用の両方に応じて強力な効果を持っているので、これは極めて重要です。例えば、我々は大きさで約1μmであるnanoARTは、強い正電荷を持っていることが示され、そしてマルチサイド幾何学的形状を有することがより迅速に細胞を1回の内部に、より安定した、マクロファージによって取り込まれ、長期間にわたって放出されるている時間6。 テストnanoART方法は、取り込まれるため、粒子の能力の単純なスクリーニングを可能にするその開発保持され、ウイルス複製を阻害する能力に加えて、マクロファージ、HIV - 1の原則の標的細胞の一つ、がリリースされました。これは、1つは、簡単にパフォーマンスに基づいてnanoARTを区別し、ヒト用nanoARTの開発の効率と速度の両方を増加させる、従って、in vivoモデルでの成功の最善の機会を持っているものを識別することができます。 それはnanoARTとex vivoでロードされ、養子ヒトHIV - 1感染マウスに静脈注射によって転送されたマウス骨髄マクロファージは2週間までのために中枢神経系を含め、アクティブな感染の部位に移動し、リリースの薬ができることが示されているウイルスの複製2-4を阻害する。さらに、これらのnanoARTロードされた細胞はまた、効果的に血漿中のウイルス感染細胞、リンパ節、脾臓、肝臓および肺の数字を減らすだけでなく、CD4 +細胞は2を保護することができた。これらの研究は、予備的なものの、細胞媒介nanoART配信システムは、血液や感染組織の両方に薬剤の臨床的に有意な量を配布することができることを示す。ためにHIV - 1感染マウスでの研究から有望な予備的結果から、我々は現在、さらに臨床使用のためのnanoARTの可能性をテストするサル免疫不全ウイルス感染サルモデルの開発を進めています。

テーブルで使用される略語：IDV：イン​​ジナビル、RTV：リトナビル、ATV：アタザナビル、EFV：effavirenz、PVA：ポリビニルアルコール、SDSのドデシル硫酸ナトリウム、P188：ポロクサマー188（また、プルロニックF68と呼ぶ）、MPEG 2000 - DSPE：メチル - ポリ（エチレングリコール）、1,2 - ジステアロイル - ホスファチジル - エタノールアミン、DOTAP：（1 - オレオイル-2 - [6 - [（7 - ニトロ- 21 ,3 - benzoxadiazol -4 - イル）アミノ]ヘキサノイル] - 3 -トリメチルアンモニウムプロパン）; PLGA：ポリ（乳酸 - コ - グリコール酸）、CTAB：セチルトリメチルアンモニウムブロマイド、DMEM：ダルベッコ改変イーグル培地; MCSF：マクロファージコロニー刺激因子、HPLC：高速液体クロマトグラフィー、HIV - 1 ：ヒト免疫不全ウイルス- 1

nanoformulated抗レトロウイルス薬の血液媒介マクロファージのキャリッジのための方法の開発

Methods Development for Blood Borne Macrophage Carriage of Nanoformulated Antiretroviral Drugs

抗レトロウイルス（ART）医薬品のための薬剤の毒性を減らすためにも役立っている間Nanoformulated薬は、薬力学及び生物学的利用能を向上させることができます。この目的のために、私たちの研究室では、ARTのレジメンを簡素化し、コンプライアンスや薬物動態を改善しながらのような毒性を減らすためにナノメディシンの原則を適用しております。製造nanoformulated ART（nanoART）のための、シンプルで信頼性の高い方法が示されています。純粋な薬剤の粒子は、界面活性剤の脂質コーティングの薄い層でカプセル化し、湿式粉砕または高圧均質化のどちらかで小さなものに大きな薬物の結晶を分画することにより生産されています。別の方法で遊離薬物は、ポリマーの液滴に懸濁させる。ここで、薬剤は、個々のナノサイズの液滴が形成されるまで、超音波によって攪拌ポリマー中に溶解させる。動的光散乱と顕微鏡検査では、粒子（粒径、電荷や形状）の物理的性質を特徴づける。それらの生物学的特性（細胞の取り込みと保持、細胞毒性と抗レトロウイルス効果）はヒト単球由来マクロファージ（MDM）で決定される。 MDMは、精製のために遠心水簸を使用してleukopacksから単離されたヒト末梢血単球から誘導される。このような血液が媒介マクロファージはヒト免疫不全ウイルス（HIV）感染臓器へnanoART配布のための細胞のトランスポーターとして使用することができます。 HIV - 1治療のためのナノ粒子に臨床的に利用可能な抗レトロウイルス薬の再パッケージすると、コンプライアンスを向上させ、積極的に疾患の転帰に影響を与える可能性があることを我々は仮定。

インジナビル、リトナビル、エファビレンツとアタザナビルのナノ粒子は、湿式粉砕、均質化と超音波を用いて製造された。総称nanoformulated抗レトロウイルス療法（nanoART）と呼ばれるこれらのnanoformulationsは、、マクロファージベースの薬物送達を評価した。単球由来マクロファージのnanoART取り込み、保持し、持続的な放出を決定した。これらの予備的研究は、臨床使用のためのnanoARTの可能性を示唆している。

Nanoformulated抗レトロウイルス薬の血液媒介マクロファージのキャリッジのための方法の開発

ナノ製剤化された薬剤は、抗レトロウイルス（ART）薬において、薬力学およびバイオアベイラビリティを向上させると同時に、薬剤毒性の軽減にも寄与し得る。...

本手順の目的は、結晶性抗レトロウイルスナノ粒子（以下、nano artと呼ぶ）を製造し、その細胞内取り込み、分泌、および抗レトロウイルス特性を試験することである。まず、超音波ホモジナイズまたはウェットミリングによって抗レトロウイルス薬を処理する。次に、対向流遠心分離法で分離した原形単球を用いて、nano art粒子の物理的特性を評価する。これらを、マクロファージコロニー刺激因子（MCSF）を含むDMEMで7日間培養し、単球由来マクロファージへの分化を誘導します。第3のステップでは、ヒト単球由来マクロファージにおけるnano artの取り込み、保持、および放出を検証します。本手順の最終ステップでは、単球由来マクロファージにおけるnano artのin vitroでの抗レトロウイルス有効性を検証します。最終的に、ナノアートの細胞への促進的な取り込みと緩やかな放出、および強固な抗レトロウイルス効果を示す結果を得ることができます。これらは、高速液体クロマトグラフィー（HPLC）による薬物濃度の測定、および逆転写酵素活性の測定による感染培養上清の試験によって決定されます。こんにちは、私はHanta Aldiです。ネブラスカ大学医療センターのHoward Gelman博士の研究室で博士研究員を務めています。我々が提示する手法は、細胞ベースの薬物送達システムをどのように橋渡し研究活動の開発に活用できるかという、ナノ医療における重要な疑問への回答に寄与します。これは、半減期を延長させたナノ製剤による抗レトロウイルス療法を用いることで達成可能です。我々の研究は、臨床におけるnano artの活用の可能性を支持するものです。こんにちは。私はCarol Schwartz Emerging Neuroscience Laboratoryで研究を行っているMD PhD学生のAri Nocheです。Gendelman博士の指導の下、ここでご紹介する技術の応用範囲は抗レトロウイルス療法にまで及びます。なぜなら、ナノ製剤化された化合物は、薬物関連の副作用を軽減させると同時に、バイオアベイラビリティと薬物動態を同時に改善できるためです。臨床的に利用可能な抗レトロウイルス薬をナノ粒子に再パッケージ化することで、服薬コンプライアンスを向上させ、疾患のアウトカムに肯定的な影響を与えることができる可能性があります。こんにちは、ハワード・ゲンドルマン博士です。私は臨床科学者であり、ネブラスカ大学医療センターの薬理学・実験神経科学科の教授および学部長を務めています。私たちの全体的な目的は、抗レトロウイルス薬を簡素化して入手しやすくし、生体内分布と薬物動態を改善することです。それでは、アリとショーンに交代します。彼らが研究室をご案内し、これらのナノ粒子の製造と開発の方法について説明します。ネブラスカ大学医療センターにおける臨床的有用性と開発についてです。ウェットミリングによるナノ粒子の製造について説明します。まず、ナノ製剤の作製に使用する薬物結晶と各種界面活性剤を秤量し、T 18 ultra Turraxミキサーを用いて、pH 7.8の10 millimolar HEPES緩衝液で完全に分散するまで混合します。連続ミリングを行う場合、製剤中の薬物含有率は1%から2%の間である必要があります。チラーとコンプレッサーがオンであり、出口圧力が約100 PSIであることを確認します。次に、粉砕メディアをタンクに充填できるよう準備し、粉砕チャンバーに50 millilitersのビーズを加えます。漏斗を使用し、メカニカルシールからの漏れを防ぐため、ネジ山や粉砕チャンバーの外側にビーズが付着していないことを確認してください。最後に、ミルチャンバーのOリングが正しい位置にあることを確認します。次に、適切なスクリーンメッシュサイズを選択し、ナットを締めて蓋を固定します。スクリーンメッシュサイズは、ビーズのサイズの少なくとも半分以上にしてください。連続ミル処理中に製品でフィルターが目詰まりするのを防ぐため、大きめのスクリーンメッシュサイズを使用してください。研磨チャンバーを下げた後、さまざまな量の界面活性剤を含む薬剤懸濁液を製品投入口に加えます。懸濁液の最小容量は 100 milliliters としてください。これにより、ミルチャンバーの過熱を防ぎ、部品の摩耗を抑えてビーズによる汚染を回避することができます。次に、ポンプを起動します。コントロールユニットを使用して、処方に合わせて流量を調整してください。その後、アジテーターをオンにし、コントロールユニットで速度を調整します。回転速度は600 rpmから4,320 rpmまで上げることが可能です。マイクロサーにおいては、研磨チャンバー上部に取り付けられた温度計で温度を監視し、過熱が起きていないことを確認してください。次に、さまざまな速度および流量でサンプルをミルし、粒径および電荷を測定するために、分光光度計Malvern Zeta Sizerを用いて、調製液から約1 mLの少量を分注して取り出します。目的の粒径が得られたら、コントロールユニットを使用してミリングを停止し、ポンプを動作させたままサンプルをフラスコに回収し、薬物を完全に排出させます。終了後は必ずポンプの電源を切り、ビーズを取り出して洗浄してください。次に、ミル懸濁液を50 mL遠心チューブに移し、遠心機を10,000 rpmに設定して30分間遠心分離を行います。遠心分離サイクルが完了したら、上澄みの量を測定し、同量の新しい界面活性剤溶液で置換します。再懸濁が完了したら、懸濁液をミリングチャンバーに移し、10分間ミリングします。約1 mLのアリコートを分取し、Zeta sizerを用いてサンプルのサイズと電荷を再度測定します。最後に、ホモジナイズによるナノアート作製のため、HPLCを用いてナノアート処方剤の濃度を測定します。Avastin Emulex C fiveを用い、既述の手順に従って薬物結晶および各種界面活性剤を調製し、懸濁液をホモジナイズ容器に移して再循環を開始します。サンプルのホモジナイズを開始する前に、チラーが作動していることを確認してください。メーターの値が 20,000 ± 2000 PSI になるまで徐々に圧力を上げ、目標の粒子径に達するまでホモジナイズを続けます。通常、これには 45 ～ 60 分かかります。定期的に約 1 mL のエリクアを採取し、前述した方法でゼータサイザー遠心機を用いて、ホモジナイズした懸濁液のサンプルの粒子径と電荷を測定します。次に、Resus懸濁液を作成後、その懸濁液をC fiveホモジナイザーに移します。循環を再開し、ホモジナイズ圧力を20,000 ± 2000 PSIに戻し、30分間ホモジナイズします。その後、cold Palmer超音波プロセッサーを用いて超音波処理により作製します。クロロメタンPLGAおよび薬物溶液を1% PVA界面活性剤溶液に注ぎ、超音波処理装置内の氷浴に置きます。振幅50%で超音波処理を開始します。なお、サンプル量が少ない場合は、振幅を約30%まで下げても構いません。サンプルを10分間超音波処理し、粒子径分析用に少量を分取します。粒子径が1.5 micronsを超える場合は、合計で最大16分になるまで、2分間隔で超音波処理を繰り返します。顕微鏡を用いてサンプルを20倍の倍率で観察し、その結果を記録します。スターラーを使用して懸濁液に十分な渦を作り、室温で一晩攪拌し続けます。24時間後に懸濁液を回収し、50 milliliter遠心チューブに移します。サンプルを8,000 rpmで20分間、5 °Cで遠心分離します。上清を除去し、サンプルの半分を75 mLのろ過済み逆浸透水に、もう半分を75 mLの0.5% CTAB（トリメチルアンモニウムブロミド）界面活性剤に再懸濁します。サンプルを再び8,000 rpmで20分間、5 °Cで遠心分離し、各ペレットを合計20 mLのマンニトール溶液で再懸濁します。最後に、ホモジナイゼーションまたはソニケーションのいずれかで製造した粒子について、Zeta Sizerを用いて粒子径を測定し、HPLCを用いてサンプルの濃度を測定します。顕微鏡による可視化の準備として、調製したナノアート懸濁液を用意し、10秒間超音波処理を行います。超音波プローブを用いて振幅20%で処理します。顕微鏡用スライドガラスのカバーガラスを取り、倒立顕微鏡の上に配置します。カバーガラスの上にnano art懸濁液15 µLにリン酸緩衝生理食塩水100 µLを加え、ピペッティングを数回繰り返して混合します。次に、20倍の対物レンズを用いてナノ粒子の形態を観察します。また、走査電子顕微鏡による観察用の試料調製を行うことも可能です。ここでは、遠心分離によって血中単球を分離した後、1×10⁶ cells/mLの濃度で精製単球を以下の添加剤を含むDMEMに懸濁し、A-J-E-O-L Jsm 6 3 0 0 F 低電圧電界放出形走査電子顕微鏡で得られた画像を示します。次に、6ウェルプレートの各ウェルに2×10⁶ cellsを播種し、5% CO₂を補充した加湿雰囲気下で7日間培養し、単球をマクロファージに分化させ、細胞の取り込みと回収を分析します。nano artを培地で最終濃度100 µMになるように混合し、目的の時点または細胞にnano artが十分に充填された時点で、各ウェルに処理用培地を1 mL加えます。すべての処理培地を除去し、1 mLのPBSで細胞を3回洗浄して、細胞に取り込まれなかった粒子を除去します。セルリフターを使用してウェルの底から付着細胞を回収し、1.7 mLのマイクロ遠心チューブに入れます。その後、細胞を4°C、1000 RCFで10分間遠心分離します。上澄みを 제거し、100%メタノールを200 µL加えて細胞を溶解させ、ソニックプローブを用いてペレットを20%の振幅で2〜5秒間短時間ソニケーションし、nano artを溶解させます。薬物含有量を分析するまで、サンプルを-80 °Cで保存します。ここに示すように、ミクロトームで切片を作成した後、透過電子顕微鏡を用いてnano artの細胞内保持を可視化することも可能です。nano archの放出を解析するための細胞処理の詳細については、細胞の取り込みおよび回収の解析について先に述べた本文を参照してください。ただし、洗浄後に細胞を回収するのではなく、指定された日、または培地が黄色に変化した時点で、PBSをMCSFおよびnano artを含まない細胞培養培地2 mLに置換してください。目的の日に培地の半分を交換します。複製細胞とともに細胞培地を1 mL回収し、薬物解析に供してください。ナノアート・バイフォーカル顕微鏡を用いてリアルタイムの取り込みを可視化するには、まずVibrantなどのDREを用意し、培地に添加します。製造元の指示に従って、色素を含む培地を成熟した単球由来マクロファージに加え、その後、1 mLの培地を用いて細胞を3回洗浄し、過剰な色素を除去します。次に、蛍光標識したナノアートを培地と混合し、標識ナノアートを含む処理培地を添加します。共焦点顕微鏡によるイメージングの直前に、60倍の対物レンズを用いて、4時間にわたり30秒ごとに画像をキャプチャします。最後に、HIV-1感染および感染能アッセイを実施できます。まず、art放出の可視化について述べた方法に従って細胞を処理します。次に、目的の日において、すべての培地を除去し、MCSFを含まず、感染多重度（MOI）が細胞あたり0.01 viral particlesとなるHIV-1 A Aを含む培地に入れ替え、24時間インキュベートします。次に、ウイルス含有培地を除去して新鮮なウイルス培地と交換し、10日間培養します。感染後10日間、細胞の生存を維持するために、1日おきまたは必要に応じて培地の半分を交換してください。各ウェルから10 µLの培地を回収して96ウェルプレートに入れ、逆転写酵素解析を行うまで-80 °Cで保存します。その後、HIV-1 p24検出を行うことも可能です。ここでは、ナノアート処理の1日後、感染多重度0.01でウイルスに曝露した細胞の形態を容易に観察できます。これらの単球由来マクロファージにおいて、ウイルス感染の証拠は見られず、細胞質内にナノ粒子がはっきりと確認できます。ここでは、ナノアート処理の10日後に細胞をウイルスに曝露させました。これらの細胞の一部は、P 24染色および多核巨細胞の形成によって示されるように感染していましたが、未処理の細胞と比較して依然として顕著な保護効果が見られました。Bの細胞の細胞質内には依然としてナノ粒子が確認できますが、aで見られたほどではありません。これらの構造は、nano artで処理されていない細胞には存在しません。これらの生細胞共焦点ビデオでは、緑色でラベル付けされたマクロファージと、赤色でラベル付けされたnano artが確認できます。ここでは、細胞に蓄積されるナノ粒子が非常に少ないことがわかります。一方、こちらでは、赤色蛍光の増加で示されるように、粒子が急速に蓄積しています。これらの差異は、HPLCを用いて薬物取り込みを分析した際に見られる結果と一致しています。さらに、細胞が能動的に粒子を取り込んでいることが確認できます。細胞内ナノアートの蓄積速度の差は、サイズ、形状、電荷などの物理的特性が、マクロファージのナノアート取り込み能および保持能に及ぼす影響を反映しています。このビデオを視聴することで、ウェットミルホモジナイゼーションおよび超音波処理技術を用いてナノアートを製造する方法について十分に理解できるはずです。これらの手法は、抗レトロウイルス・ナノ粒子の製造に有効な方法です。ウェットミリングおよびホモジナイズは、脂質界面活性剤内で大きな薬物結晶粒子をより小さなナノ粒子へと分画させるために用いられ、超音波処理技術はポリマー内で個々のナノサイズの薬物液滴を生成します。ここでは、ナノ粒子の輸送を評価するための試験プラットフォームとして、ヒト単球由来マクロファージを使用する方法も実証しました。本試験法により、粒子の細胞への取り込み、保持、放出能力、およびウイルス複製を抑制する能力を非常に簡便にスクリーニングすることが可能になります。これにより、研究者はin vivoで成功する可能性が最も高く、最終的に感染したヒトへの使用に適したナノアートを特定することができます。これらの実験の完全な結果は、私たちの論文「Online Nano」に掲載されています。この論文は「Nano Formulated Antiretroviral Drug Combinations Extend Drug Release and Antiretroviral Responses in HIV V one Infected Macrophages, implications for Neuro AIDS Therapeutics」という題で、Journal of Neuro Immune Pharmacology 2010に掲載されました。ありがとうございました。

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