エンジニアリングされた許容性細胞株を用いた野生種 Drosophila からの内在性ウイルスの分離

同一の性別および種の麻酔済み成体Drosophilaを入れたチューブを用意します。

バッファーを加え、ホモジナイズして内在性ウイルス集団および細菌を放出させます。

ホモジネートを遠心分離し、次いで上清をメンブレンで遠心ろ過して、細菌およびデブリを除去します。

ろ液を、RNAウイルスに感受性を持つように作製されたDrosophila細胞の培養液を含むマルチウェルプレートに移し、インキュベートします。

ウイルスは受容体介在性エンドサイトーシスを介して宿主細胞に進入します。

細胞内に取り込まれると、ウイルスゲノムが複製され、二本鎖RNA（dsRNA）が産生されます。 中間体。

ホスト細胞はdsRNAに結合するサプレッサータンパク質を発現し、これにより、ホストの防御酵素であるDicerによるdsRNAの分解を防ぎます。

これによりウイルスRNAの合成とウイルスタンパク質の産生が可能になり、ウイルスの複製および増幅が促進されます。

高濃度のウイルス負荷は宿主細胞の増殖を妨げ、細胞変性効果を引き起こします。

プレートを短時間遠心分離します。

ウイルス集団を含む上清を回収し、後続の解析のために低温で保存します。