電子顕微鏡を用いたFaustovirusの可視化およびサイズ評価

Faustovirusとして知られる巨大ウイルスに感染したアメーバの培養液を用意します。

Faustovirusを含む培養上清を回収します。

グロー放電処理した電子顕微鏡用グリッドに、上清を滴下します。

ウイルス粒子をグリッドに吸着させるため、インキュベートします。

フィルターペーパーでグリッドを吸い取り、未結合のウイルス粒子を除去します。

モリブデン酸アンモニウムを1滴下します。

モリブデン酸アンモニウムは、ウイルスの周囲のグリッドに結合して背景を暗くすることでコントラストを高める、ネガティブ染色剤として作用します。

フィルターペーパーでグリッドをブロッティングし、余分なモリブデン酸アンモニウムを除去します。

グリッドをペトリ皿に置き、乾燥させます。

次に、グリッドをサンプルホルダーに設置します。

ホルダーを電子顕微鏡内に導入します。

Faustovirusの画像を撮影し、そのサイズを測定して、さらなる解析に役立ててください。

電子顕微鏡観察を行うには、陽性サンプル5 µlをグロー放電処理したグリッド上に滴下し、室温で約20分間インキュベートします。グリッドを慎重に乾燥させた後、1%モリブデン酸アンモニウムを少量加え、10秒間インキュベートします。液滴を慎重に除去した後、グリッドを5分間乾燥させます。次に、電子顕微鏡を20 keVに設定します。その後、グリッドをホルダーにセットし、ホルダーを顕微鏡内に導入します。真空オーバービューアイコンをクリックして、真空状態を確認します。次にバルブを閉じ、スポットサイズを5、倍率を25,0倍に設定して観察を開始します。撮影画面上で巨大ウイルスを特定した後、計測ツールを使用してウイルスのサイズを測定します。

テキストプロトコルに従い、分子生物学的な解析およびウイルスゲノムのシーケンシングを行う。