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アデノ随伴ウイルス（AAV）ベクターと宿主由来の不純物を含む、ろ過済みの細胞溶解液から開始します。
溶解物をヘパリンベースのアフィニティークロマトグラフィーカラムに通します。
ウイルスキャプシドタンパク質は、負に帯電したヘパリン基に静電的に結合します。
バッファーでカラムを洗浄し、結合しなかった不純物を除去します。
膜状のデブリを可溶化させるため、界面活性剤含有バッファーを適用します。
界面活性剤を含まないバッファーで再度洗浄します。
カチオンを添加したバッファーを導入してイオン環境を構築し、次に中程度の塩濃度バッファーで洗浄して弱く結合した不純物を除去します。
高塩濃度バッファーを加え、カプシドとヘパリンの相互作用を解消してウイルス粒子を溶出させます。
完全なウイルス粒子が濃縮された溶出分画を回収し、フィルター膜を備えた遠心濃縮チューブに移します。
チューブを遠心して過剰なバッファーを除去し、濃縮されたウイルス画分を別のチューブに回収します。
膜をバッファーで洗浄し、残存するウイルス粒子を回収して収量を最大化します。
粗抽出液を4°Cで一晩解凍します。
融解後、0.2 micronフィルターを用いてろ過します。精製ステップの直前に、使用するheparin-Sepharoseカラム1本につき4 mLのフィルター前処理緩衝液を加え、遠心濃縮器をパッシベーションします。チューブをペリスタルティックポンプにセットしてください。
溶液および培地を順次流します。5 mLのheparin-Sepharoseカラムをチューブに接続し、25 mLのBazell DMEMをカラムに通してクロマトグラフィーの準備をします。次に、ろ過した粗溶解液を0.2 µMの濃度で、1秒間に1〜2滴の流速でカラムに負荷します。
カラムを順次洗浄し、マグネシウムおよびカルシウム含有30 millimolar塩化ナトリウムHBSSを用いて5 mLずつ5回溶出させ、5つの溶出液をE1からE5としてラベルします。準備ができたら、前処理バッファーを含む遠心濃縮器を90 ×gで2分間遠心分離します。フロースルー（透過液）を廃棄します。遠心濃縮器のフィルターを、マグネシウムおよびカルシウム含有HBSS 4 mLで、100 ×gで2分間遠心分離して洗浄します。
次に、溶出液E2を遠心濃縮器に加え、100 ×gで5分間遠心分離します。ろ液は廃棄してください。同様に、濃縮後のウイルス量が約1 mLになるまで、溶出液E3を遠心濃縮器で遠心分離します。
P20フィルターチップを用いて、遠心濃縮器から濃縮ウイルスを回収し、滅菌済みの1.5 milliliter遠心チューブに移します。ウイルスの回収後、マグネシウムおよびカルシウム含有HBSS 20 microlitersで遠心濃縮器を洗浄します。メンブレンに付着したウイルスを剥離させるため、30秒間激しくピペッティングし、濃縮ウイルスを同じ1.5 milliliter遠心チューブに回収します。
チューブを十分に混ぜ合わせます。