ウイルス粒子の濃縮および精製

宿主細胞のデブリが混在したウイルス粒子の懸濁液を用意する。

遠心分離を行い、大きなデブリをペレット化します。ウイルス粒子と小さなデブリを含む上清を回収します。

上清をろ過し、残っている小さなデブリを除去します。

ろ過液にポリエチレングリコール（PEG）を含む塩溶液を加えます。チューブを転倒混和し、インキュベートします。

PEGは分子混雑剤として作用し、ウイルス粒子を互いに接近させることで、その沈殿を促進します。

同時に、塩がウイルス粒子間の静電反発を中和することでこの効果を高め、ウイルスの凝集を可能にします。

チューブを遠心分離し、ウイルス凝集塊をペレット化します。PEG含有量の多い上清を廃棄します。

遠心分離を繰り返し、残った上清をすべて廃棄します。

バッファーを加え、撹拌しながらインキュベートしてペレットを再懸濁する。

ウイルス粒子を含む懸濁液を分注し、ウイルスの構造的完全性と感染性を維持するため、超低温で保存してください。

ウイルス含有上清を 2000 × g で 10 分間遠心分離します。その後、0.45 µm の低タンパク結合シリンジフィルターでろ過し、ウイルス培地を精製します。次に、培地に 5X ポリエチレングリコール 6000 溶液を添加します。チューブを数回反転させて混合してください。その後、ウイルス混合液を 4 °C で 12 時間以上インキュベートします。

9日目に、ウイルス混合液を2,500 ×gで45分間遠心分離します。45分後、上清を捨て、さらに2分間遠心分離します。続いて、再び上清を除去します。その後、320 µLの滅菌PBSを加えてペレットを再懸濁し、シェーカーを用いて室温で30分間インキュベートします。翌日、ウイルスを分注し、分注したサンプルを-80 °Cで冷凍保存します。