Name: によるマウス網膜神経節細胞のトランスフェクション in vivoでエレクトロポレーション (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 26 s
Description: 学ぶ in vivoエレクトロポレーションによるマウス網膜神経節細胞のトランスフェクション法。DNA溶液の網膜内注入と電気パルス適用により、発生段階の視覚投射経路を標識し、神経発生メカニズムを解明する。

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pCAG - gapEGFPプラスミド博士S. McConnellさん（スタンフォード、カリフォルニア州）から寄贈されたもの。 pCAG - tdTomatoプラスミド博士M.フェラー（バークレー、カリフォルニア州）から寄贈されたもの。我々は、技術サポートのためのパイロットスタディとCrairラボのメンバーの2つのプラスミドのCre / loxP部位戦略を検証するための単一細胞標識とアンSchohl（モントリオール、QC）の2つのプラスミドの戦略の使用を提案して博士エドワードRuthazerに感謝。 R01 MH62639（MC）、NIH R01 EY015788（MC）とNIH P30 EY000785（MC）によってサポートされています。

1。セットアップエレクトロポレーション用の機器<ol><li> 電極 ：我々は、電極として使用するデュモン＃5鉗子を変更した。 <ol><li>鉗子を分離し、分解します。 </li><li>各芯の広い端に半田線。電線接続されていると絶縁テープで先端部が露出突起の先端の約25〜30 mmを残して折り返します。 </li><li>春のアクションを提供する2つの突起の間に任意の適切なプラスチックスペーサー（ボタンなど）と一緒に修正された鉗子を元に戻します。 </li></ol></li><li> 電気機器：我々は、エレクトロポレーションし、配信されるパルスの波形と数を確認するためにオシロスコープおよびオーディオモニターのための電流パルスを供給する電気刺激装置を使用する。 <ol><li>また、刺激装置と直列に接続されているフットペダルに鉗子の一芯からワイヤを接続します。フットペダルはスイッ​​チとして機能します。それは、エレクトロポレーション用の回路を完了すると落ち込んで。 </li><li>他の突起からの電気刺激装置にワイヤを接続します。 </li><li>オシロスコープおよびオーディオモニターに刺激を接続します。 </li></ol></li><li> マイクロピペットおよびインジェクタは、セットアップ ：私たちは、直接網膜に色素またはDNA溶液の非常に少量を注入するために鋭いプルガラスピペットとNanoinject IIインジェクターシステムを使用してください。 <ol><li> 3軸マニピュレータ上にマウントインジェクターシステム。 </li><li>長いテーパーと小さな先端のガラスピペットを引き出します。 </li><li>バック鉱物油とインジェクタへのセキュリティで保護された（詳細についてはNanoinect II取扱説明書を参照）で引っ張らピペットを埋める。 </li><li>鋭いmicrodissectingはさみを使って小さな開口部（〜2-3μm）を作成し、ピペットの先端をカット。 </li><li>ピペットの先端を介して注射液を所望の量でピペットを埋める。先端の整合性が保持している限りとして、それは複数の注射や動物に使用することができます。 注：私は）十分な注射液が充填鉱物油が目に注入されることのないようなヒントにロードされていることを確認します。 ⅱ）Nanoinject IIシステムとこのビデオで使用される特定の電子機器はRGCsの成功したラベルを得るために重要ではありません。そのような他の一般的な刺激とpicospritzerやエレクトロなどの他のデバイスで作られた注射は、ラベルのRGCsにも使用できます。 </li></ol></li></ol> 2。 RGC標識用プラスミドソリューション<ol><li> RGCsの小さなクラスターを標識するため ：私たちは、CAGプロモーター（CMV即時初期エンハンサーとニワトリβ-アクチンプロモーター）の制御下に構造エンコーディングEGFPを（2〜3μg/μLの）強化された緑色蛍光タンパク質）を使用します。 EGFPは細胞膜（mut4EGFP）12にそれを標的とGAP - 43（成長関連タンパク質- 43）のパルミトイル化シーケンスでタグ付けされます。このコンストラクトはpCAG - gapEGFPと呼ばれます。 </li><li> 単一の細胞標識のために：我々は2つの構成要素の組み合わせを使用してください。最初のベクトルは、Creリコンビナーゼを駆動するCAGプロモーター（pCAG - Creを、Addgene [ケンブリッジ、MA]プラスミド13775）13であり、第二のベクターはEGFP（pCAG - LNL - gapEGFP）を標的膜に続くfloxed STOPカセットが含まれています。 pCAG - CRE（〜0.15-ng/μLが）のおかげで、少数の細胞（に強いEGFPの発現を閉じ込め、pCAG - LNL - gapEGFP（1〜2μgμL）より約1,000-10,000倍低い濃度で使用されています比較的低pCAG - Creを濃度）。 </li></ol> 3。網膜インジェクション、エレクトロポレーションプロトコル<ol><li> P5よりも古いマウスは、ケタミンのカクテルの腹腔内注射（0.7 ml / kgを）（4.28 mg / mLの）で麻酔しながらP5の仔に出生後0日目は（P0）、低体温症によって麻酔し、キシラジン（0.82 mg / ml）を、およびアセプロマジン（0.07mg/ml）14。 </li><li>ホットビーズ滅菌器内のすべての手術器具と電極チップを滅菌する。眼への熱損傷を避けるために、使用前に滅菌生理食塩水の両方で、その後涼しい。 </li><li>解剖の範囲と位置インジェクタ下の場所のマウス。 </li><li> P14（アイ開口前）よりも若いマウスの場合、外科的にミクロ解剖春のはさみb を持つ将来の眼瞼開裂の全長に沿ってカットすることでまぶたを開く。 </li><li>眼球が部分的に優しく鉗子Cの先端で目の周りに圧力を加えて突出してください。 </li><li>優しく眼球の周りの皮膚をつまんで場所に目を保持する。 </li><li>マイクロマニピュレータを調整し、眼球の近くにピペットをもたらす。 </li><li>注射液の数滴を追放し、従ってピペットの目詰まりがないことを確認するために、Nanoinject IIシステムに接続されているフットペダルを、押します。 </li><li>眼球を安定させる一方で、ガラスピペットの先端が網膜色素上皮を介して貫通し、網膜に入るようマニピュレータを移動する。 </li><li> DESを注入するNanoinject IIシステム用のフットペダルを押すことにより、溶液の量を赤外LED。例えば、単一のRGCsにラベルを付ける私達は2.3 4.6nLの単回注射を行う。 </li><li>ピペットを収納し、慎重に注射部位を介して直接電極チップを配置し、回路を完成し、目をエレクトロに刺激するためのフットペダルを押し下げる。我々は一般的に25V強、50ミリ秒持続時間、間隔1秒の設定で矩形パルスを使用してください。 10パルス（各極性の5パルス）P4と6パルスより古いマウス（各極性の3パルス）に適用されていますがP0にP3マウスに適用されます。 </li><li>慎重にソケットに戻す眼球を押して、カットのまぶたを介して滅菌眼軟膏を適用する。 </li><li>温度制御された熱パッドで、十分な復温と機動性を含めて完全な復旧、の上に置いて動物は、母親に動物を返します。 </li><li>動物のような運動機能の喪失、新郎の姿勢異常や障害など、痛み、苦痛や不快感、任意の符号のための12時間ごとに監視します。麻酔、注射とエレクトロポレーションの繰り返しのラウンドは、同じ動物で実行されるべきではない。 </li></ol> 4。ノート<ol><li>このビデオで説明されている注射の方法は、"ブラインド"の注射です。アルビノマウスと着色されたソリューション（高速青の微量とDIIまたはプラスミド溶液）で作業する際に、これは注射の量や場所を可視化することが可能です。しかし、色素性マウスと系統の注入場所は、直接可視化することはできず、それゆえに口頭で、意図された網膜の場所やどのように遠くまでは特にRGC層をターゲットにピペットを移動する必要があるに達しているかどうかを記述することは困難です。したがって、我々は強くこれらの注射は、網膜ですぐに視覚化できるため、最初のアルビノマウスのDIIの注射で開始する新規ユーザーに助言し、RGC網膜に投影し、脳のラベリングは、注入の品質を評価するために使用することができます。フォーカル注射のためのN、N -ジメチルホルムアミド（100％）で10％のDIIを準備します。この手順を習得されるとユーザーは、一貫して着色したマウスでは明らかなDNAプラスミドソリューションでRGCsをターゲットにすることができるはずです。 </li><li>このビデオで説明されている注射の方法は、retinotopy勉強する細胞のラベル小さな集団（4.6nLラベル数百RGCS）14とに結合した蛍光色素（Alexa555、488など）とバルクラベルのRGCsに焦点DIIの注射をするために使用することができますコレラ毒素サブユニットBは、上記の＃10のエレクトロポレーションのステップを除く、眼特異分離を検討する。すべてのソリューションのP14より若いマウスのためのP14と1 - 2uLより古いマウスの2 - 3uLの最大総注入量が推奨されます。 </li><li>ピペットは、インジェクタにピペットを装着する前にミネラルオイルで埋め戻し、チップを破壊することによって続いて注入するソリューションを充填することができます。ピペットの先端からロードすることは非常に粘性と困難な一般的な高濃度のDNA溶液を（〜6ug/uL）、使用するときに特に便利です。 </li><li>ガラスピペットの目詰まりになった場合、慎重に染料（DII）ソリューションのためのDNA溶液とエタノール（100％）のために水に浸した綿棒でピペットの先端を拭きます。 </li><li>目に注入した後、眼球からピペットチップを収納して、再度注入するフットペダルを押してください。これは、先端が注入プロセスの間に詰まるされていないことを確認することです。解が分注されていない場合、それは注入が成功しない可能性が非常に高いです。しかし、これは注射が失敗したことを絶対的な記号として解釈されるべきではない。複数の注射部位や細胞の大規模な数のラベルが望まれる場合実験者は再び同じ目を注入することができる。 </li><li>シングルRGCsを標識するため、Nanoinjectのコントロールボックスで減速する射出速度を設定します。これにより、さらにシステムが同時にガラスピペットの先端が眼球からすぐに撤回されている間に解決策を分配するために、この設定でより多くの時間がかかるように網膜に注入された溶液の量を減らします。 </li><li>それは（これは目が通常よりも明らかに小さい場合に、回復の数日後に明らかになる）目を損傷することは非常に容易であるため、生後0〜3（P3 P0に）マウスのエレクトロポレーションは、さらに注意が必要です。印加されるパルスおよび電圧の数を減らすと、早期新生児マウスのお勧めです。 P4の後に、眼球はエレクトロポレーションによる損傷に対してより弾力性があります。 </li><li> EGFPまたはRFPの経験膜をターゲットバージョンでは（'gapEGFP'は、12を参照）、脳にretinofugal予測を調べるための未修正のGFPよりはるかに優れています。しかし、変更をターゲットと膜を欠いているpCAG - tdTomatoは、、また、うまく機能（図1E）。さらに、デキストランコンジュゲートの蛍光色素は、上述のエレクトロポレーションプロトコルを使用してラベルのRGCsするために使用することができます。 </li><li>一般に、10注射のうち9はデュアルプラスミドアプローチで、ラベル付けRGCsに注射のものみの約15％を鉛化されなくなります。レッテルを貼られるだけで、単一のRGCになります。成功事例の数は、1つ目の複数の場所にDNAを注入することにより、またはそれぞれの目に異なる蛍光タンパク質をコードするプラスミドを注入することにより増加することができます。 </li></ol> 5。代表的な結果 RGC標識は、エレクトロポレーションとトランスフェクション後少なくとも3週間の維持発現後24時間でRGCsにおけるEGFPのラベルで、P2からP25まで、あらゆる年齢層で観察された。 蛍光標識された樹状突起（図1A、B）と、単一のRGCsの軸索の喬木（図1F）が明確に可視化し、再構成することができる。 離れてRGCsから、この手法は、水平細胞、双極細胞と様々なアマクリン細胞のサブタイプ（図1C）などの他の網膜細胞の種類にラベルを付けるために使用することができます SCの通常のretinotopy（図1E）が示すように、この方法では、視覚的なマップの洗練の通常の時間経過を妨げることはありません。 すべての年齢層では、ケースの約90％、pCAG - gapEGFPの小容量注入（〜2.3 - 4.6nLは）いくつかのRGCs（図1D）での発現につながった。 RGCs（図1A、B、D）やアマクリンのような他の細胞型を含む単一の網膜神経細胞のラベリングにつながったpCAG - CREおよび動物ごとpCAG - LNL - gapEGFP組み合わせのプラスミドの単回注射を使用して、試験の約15％で細胞（図1C）。 <img src="/files/ftp_upload/2678/2678fig1.jpg" alt="図1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図1"> 図1 - 。P8でシングルスターバーストアマクリン細胞の、B.出生後14日目のフラットマウントの網膜では、単一の網膜神経節細胞（矢印の頭が軸索を指す）というラベルのEGFPの例（P14）】実施例D。 。P14でフラットマウント網膜にRGCsとアマクリン細胞を含む網膜神経細胞を標識したEGFPのクラスタ。右目のE.背と腹側RGCsがエレクトロと左眼でEGFPと時間と腹RGCsで標識されたが電気めっきされたとP1でtdTomatoで標識。ラベル付けRGCsによって形成されるターゲットゾーン（アスタリスク）はP9のSCで、その地形的に正しい場所（ホールマウント、白の輪郭）で見ることができるのRGCアーバ（2次元投影）とラベルの付いた単一のEGFPの。F.例 SCの矢状断面（250μm厚）（点線）。明確にするために、画像の（D）及び（F）グレースケールに変換し、反転されています。スケールバー（ミクロン）：（） - （D）、（F）：100;（E）：500

<ol><li>Huberman, A. D., Feller, M. B., Chapman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+underlying+development+of+visual+maps+and+receptive+fields%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mechanisms underlying development of visual maps and receptive fields.</a> Annu Rev Neurosci. 31, 479-509 (2008).</li>
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<li>Ruthazer, E. S., Haas, K., Javaherian, A., Jensen, K., Sin, W. C., Cline, H. T. In vivo time- lapse imaging of neuronal development. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRuthazer%2C+ES+%22Imaging+in+Neuroscience+and+Development%3A+A+Laboratory+Manual%22">Imaging in Neuroscience and Development: A Laboratory Manual</a>. Yuste, R., Konnerth, A. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, NY. 191-204 Forthcoming.</li>
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<li>Okada, A., Lansford, R., Weimann, J. M., Fraser, S. E., McConnell, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+cells+in+the+developing+nervous+system+with+retrovirus+expressing+modified+green+fluorescent+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Imaging cells in the developing nervous system with retrovirus expressing modified green fluorescent protein.</a> Exp Neurol. 156, 394-406 (1999).</li>
<li>Matsuda, T., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+expression+of+transgenes+introduced+by+in+vivo+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Controlled expression of transgenes introduced by in vivo electroporation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 1027-1032 (2007).</li>
<li>Plas, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((morphogenetic+proteins%2C+eye+patterning%2C+and+retinocollicular+map+formation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">morphogenetic proteins, eye patterning, and retinocollicular map formation in the mouse.</a> J Neurosci. 28, 7057-7067 (2008).</li>
</ol>

利害の衝突は宣言されません。

このビデオでは、in vivoでのエレクトロポレーションプロトコルで示している蛍光タンパク質をコードするDNA構築物と出生後のマウスの網膜神経細胞の単一または小さなクラスターのラベリング結果。以前の研究では、そのエレクトロポレーションは、通常のRGC軸索アーバ洗練と干渉していないことを示す、親油性染料とRGCラベルを使用しているものとしてdLGNとSCに蛍光標識したRGCの突起の小さなクラスタでは、同様の投影パターンを再現。我々は正常と中断ビジュアルマップで様々なマウスモデルにおける単一およびRGCsのグループの両方のレベルでの網膜部位のマップを分析するためにこのプロトコルを利用してきた。 我々の結果は、出生後の網膜における差別化された網膜神経細胞を確実に生体内エレクトロポレーションに使用してトランスフェクトすることができることを示している。 生体エレクトロポレーションプロトコルの出生後には、空間的かつ時間的に制限された方法で同時ラベリングとRGCsの遺伝子操作を可能にするこ...

<table border="1"><tbody><tr><th>材料</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th></tr><tr><td>デュモン＃5鉗子</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11252〜20 </td></tr><tr><td>電気刺激装置</td><td>グラスの楽器</td><td>モデルS4 </td></tr><tr><td>オシロスコープ</td><td>アジレント</td><td>モデル54621A </td></tr><tr><td>オーディオモニター</td><td>グラスの楽器</td><td>モデルAM8B </td></tr><tr><td>プラー</td><td>サターインスツルメンツ</td><td>モデルP - 97 </td></tr><tr><td> Vannasはさみ</td><td>世界の精密機器</td><td> 14003 </td></tr><tr><td>マイクロはさみB </td><td>テッドペラ</td><td> 1347 </td></tr><tr><td>デュモンAA鉗子C </td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11210〜20 </td></tr><tr><td> IIシステムをNanoinject </td><td>ドラモンドサイエンティフィック</td><td> 3-000-204 </td></tr><tr><td>ガラスピペット</td><td>ドラモンドサイエンティフィック</td><td> 3から000 - 203 - G / X </td></tr><tr><td>フットペダル</td><td>ドラモンドサイエンティフィック</td><td> 3-000-026 </td></tr><tr><td>鉱油</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> M3516 </td></tr><tr><td> DII </td><td>インビトロジェン</td><td> D - 383 </td></tr><tr><td> N、N -ジメチルホルムアミド</td><td>シグマ</td><td> D4551 </td></tr></tbody></table>

によるマウス網膜神経節細胞のトランスフェクション in vivoでエレクトロポレーション

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

中脳へのRGC予測の対象指定と洗練は、開発時に神経接続の形態の方法正確なパターンを研究するための一般的かつ強力なモデルシステムです。マウスでは、retinofugal予測は、地形的および視床と上丘（SC）の外側膝状核（dLGN）でフォームの眼特異層に配置されています。 retinofugal突 ​​起のこれらの正確なパターンの開発は、典型的には、西洋ワサビペルオキシダーゼ1〜4と蛍光色素およびトレーサーとRGCsの集団を、標識することにより研究されている。しかし、これらの方法は、網膜部位の地図形成の根拠となる個々のRGC軸索のあずまや形態の発達的変化への洞察を提供するために、あまりにも粗いです。彼らはまた、RGCsの遺伝子操作のために許可されていません。 最近、エレクトロポレーションは、網膜5月11日に荷電分子を送達するための正確な空間的、時間的な制御を提供するための効果的な方法となっています。現在の網膜エレクトロポレーションプロトコルは、遺伝子操作が可能で、出生後のマウスのRGCsの単一または少数のクラスタのretinofugal予測のトレースをしないでください。それは 、in vivo エレクトロポレーションで生後は標識効率が極めて低いためRGCsをトランスフェクションするための実行可能な方法ではない、したがって、RGC前駆細胞の分化と増殖6を受けている胚の年齢でターゲティングが必要と主張されています。 このビデオでは、標的遺伝子の配信、shRNAを、そして出産後マウスRGCsに蛍光デキストランのためのin vivoエレクトロポレーションプロトコルで説明します。この手法は、分岐、ラミネーション、再生および回路の開発の様々な段階におけるシナプス形成、軸索の退縮を含む神経発達のいくつかの側面に関与候補遺伝子の効率的なスクリーニングのための迅速で効果的なコストかつ比較的容易にプラットフォームを提供します。要約すると我々はここで知覚マップの開発の根底にある分子メカニズムのさらなる洞察を提供する貴重なツールについて説明します。

我々は、実証<em&gt; in vivoで</em網膜神経節細胞（RGCs）と幅広い年齢層にわたって出生後のマウスでは他の網膜の細胞型の単一または小さなクラスターをトランスフェクトするための&gt;エレクトロポレーションプロトコル。ラベルを付けたり、遺伝的に生後RGCsを操作する機能<em&gt; in vivoで</em&gt;発達研究のための強力なツールです。

中脳への網膜神経節細胞（RGC）投射のターゲティングおよび精緻化は、神経回路の精密なパターンがいかにして形成されるかを研究するための、普及している強力なモデルシステムである。

本実験の全体的な目的は、生後マウスにおけるin vivoエレクトロポレーションを用いて、単一または少数の網膜神経節細胞にトランスフェクションを行い、網膜神経投射の発達を研究することである。これは、外科的に眼球を露出させ、少量のプラスミドDNA溶液を網膜に直接注入することで達成される。第二のステップとして、注入部位の直上の眼球に電極を配置して電気パルスを印加し、プラスミドDNAを網膜ニューロンへ導入させる。次に、任意の週齢で、エレクトロポレーションを施した網膜と脳を採取し、トランスフェクションされた網膜神経節細胞およびそれらのCNSへの投射を可視化します。その結果、さまざまな皮質下標的構造において、標識された網膜神経節細胞の樹状突起と軸索ARB（axonal ARBs）の両方が蛍光標識されることが示されます。in-utero網膜エレクトロポレーションのような既存の手法に対する本手法の主な利点は、侵襲性が低く、視交叉での交叉などの初期の軸索ガイダンス事象を妨げないことです。また、出生後のマウスにおいて、精密な空間的および時間的制御により、少数の集団または単一の網膜神経節細胞を標識することが可能になります。エレクトロポレーション用電極を作成するには、Dumont 5番ピンセットの片方の先端を切り離し、各ピンの基部にワイヤーをはんだ付けします。ワイヤーの基部を絶縁体やテープで巻き、ピンの間にプラスチック製のスペーサーを装着して、バネのような動作を可能にします。電極が完成したら、片方のピンからのワイヤーをフットペダルに接続します。このフットペダルは、電気刺激装置に直列に接続されています。フットペダルを押すと、電極に電流が流れます。次に、もう一方のプラグからのワイヤーを電気刺激装置に接続します。最後に、電気刺激装置をオシロスコープとオーディオモニターに接続します。ピペットプラーを使用して、インジェクターシステムをベンチ上の3軸マイクロマニピュレーターに取り付けます。nano Inject twoに付属のニードルを用いて、テーパーが長く先端が小さい引いたガラスピペットを作成します。引いたピペットにミネラルオイルを満たし、マイクロインジェクターに固定します。鋭利なマイクロダイセクション鋏を使用します。装着したピペットの先端を切り、2〜3 µmの開口部を作成します。開口した先端から注入液を吸い上げ、ピペットを満たします。生後4〜5日のマウスを低体温法で麻酔します。その後、足指を挟んで麻酔状態を確認します。麻酔したマウスを解剖顕微鏡下に置き、マイクロディセクティングシザーズを用いて、将来の眼瞼裂に沿って切開し、外科的に眼瞼を開きます。ピンセットで眼窩周辺を軽く圧迫し、眼球を突出させます。マイクロマニピュレーターを調整し、ピペットを眼球の近くに配置します。マイクロインジェクション

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マウス網膜神経節細胞における遺伝子発現のための子宮内および生体外でのエレクトロポレーションで

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この記事は、そのままマウスの網膜における蛍光標識神経集団から個々のセルの記録を示しています。二光子赤外線励起を使用してtransgenetically標識された細胞は、それらの光反応、受容野の特性、及び形態を研究するためのパッチクランプ記録を対象としていた。...

無傷の網膜におけるGFP発現細胞集団の電気生理学的特性

条件付きで大人のゼブラフィッシュの網膜での標的タンパク質の発現をノックダウンする方法は、硝子体内アンチセンスモルフォを注入して網膜にそれらをelectroporating含まれ、説明されています。得られたタンパク質を再生成または無傷の網膜におけるタンパク質の役割をテストできるようになる、数日間ノックダウンされている。...

アダルトゼブラフィッシュ網膜にモルフォの in vivoエレクトロポレーションに

このビデオの全体的な目標は、対象と網膜の注入を実行する方法を示すことであると...

ニワトリ胚の網膜におけるOVOエレクトロポレーションに

出典: Denaxa, M., el al., Transplantation of Chemogenetically Engineered Cortical Interneuron Progenitors into Early Postnatal Mouse Brains.J. Vis. 経験。...

マウス皮質介在ニューロン前駆細胞におけるアガロース包埋エレクトロポレーション支援遺伝子導入

この手順は、子宮内エレクトロポレーションによって、発生中のマウス前脳の介在ニューロンを標的にする方法を示しています。この技術は、皮質の表層に向けられた介在ニューロンサブタイプで選択的な遺伝子発現を達成するのに特に効率的でした。...

皮質介在ニューロンのサブタイプ選択的エレクトロポレーション

ニワトリ胚網膜細胞培養物は、感光体の生物学の研究のための貴重なツールを構成しています。私たちは文化の前に網膜のプラスミドエレクトロポOVOの元に基づいて、効率的な遺伝子導入技術を開発しました。この技術はかなりこのシステムの実現可能な遺伝子操作を行う、現在利用可能なプロトコルを介してトランスフェクション効率を向上させます。...

初代細胞培養研究のためのひよこ網膜における効率的な遺伝子導入：元オボエレクトロポレーションアプローチ

このプロトコルは、解剖実験的に操作し、ニワトリ胚の培養全体の網膜外植する方法について説明します。高い成功率、有効性と再現性をエレクトロポレーションおよび/ ​​または試薬物質、 すなわち、酵素阻害剤のためのプラスミドの効果をテストするために必要な場合、外植片培養は便利です。...

エレクトロポレーションおよび化学試薬の治療のための鶏胚からの全網膜の外植片

網膜下注射は、光受容体およびRPE疾患の治療薬の前臨床開発に不可欠な技術です。術中の成功率を改善し、網膜損傷を最小限に抑えるマウスにおける最適化された経強膜網膜下注射技術について説明します。...

マウスにおける最適化された低侵襲経強膜網膜下注射技術

学ぶ in vivoエレクトロポレーションによるマウス網膜神経節細胞のトランスフェクション法。DNA溶液の網膜内注入と電気パルス適用により、発生段階の視覚投射経路を標識し、神経発生メカニズムを解明する。

によるマウス網膜神経節細胞のトランスフェクション in vivoでエレクトロポレーション

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