Name: 下大静脈血栓症のマウス完全な停滞のモデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 34 s
Description: 学ぶマウス下大静脈結紮モデルによる血栓症と炎症の研究。完全停滞を誘導し、血栓と静脈壁の相互作用や急性から慢性への炎症遷移を評価する方法を解説します。

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1。マウスの麻酔の手順<ol><li>動物は、毎分0.5リットル（気化器制御）の流量で、自分のケージから取り出し、5％イソフルランおよび100％酸素でガスの誘導のための麻酔術前誘導のチャンバー内に配置されます。 </li><li>マウスは、麻酔の誘導チャンバ内鎮静チャンバーから除去し、髪の毛の脱毛は、（1分）使用されている場合、腹側腹部を電気バリカンで剃毛、またはチャンバー内に保持されています。 </li><li>まだ鎮静下で、彼らの重量を測定している間、目がイソフルランと酸素を使用して、ノーズコーンと、滅菌眼軟膏が塗布してから、全身麻酔下での加熱装置を循環する暖かい水で背recumbancyに配置されます。この時点で、酸素の割合は、毎分0.2リットルに削減されます。 </li><li>腹部はクロルヘキシジン液（クロルヘキシジン二酢酸は急速にbacterialcidalと持続性がある）を噴霧し、滅菌ガーゼで拭いて三回か手術部位はきれいになるまでさ。 </li></ol> 2。マウスマイクロ外科および回復手順<ol><li>腹側正中切開（2cmは）腹部を露出皮膚や腹壁を通して虹彩をハサミで作られています。滅菌生理食塩水に浸した2x2inのガーゼは、動物の左側に腸を反映するために使用されます。マウスの制止する人は、下大静脈（IVC）の可視化を可能にする場所に置かれている。 </li><li>この時点で、0.2リットル/分の2％isofluranceと100％の酸素率のメンテナンスレベルは、外科的処置の残りのために使用されます。 </li><li>鈍的切開は、滅菌アプリケーター綿棒や余分な繊細な虹彩の半分の湾曲した組織鉗子を用いて促進される。ケアは、彼らは非常に壊れやすいために、マウス組織の取り扱いには注意が必要です。腹腔内に入ると、このようにIVCの可視化を可能にする、滅菌ドレープの上に腸を反映して体外に出すために無菌の生理食塩水に浸した4x4inのガーゼを使用してください。 </li><li>側枝が7から0、非反応性prolene縫合糸で連結している間に腎静脈から腸骨分岐へのすべてのIVCバック枝は、、焼灼されています。 </li><li> IVCは、腎静脈にだけ劣っ、大動脈から分離されている。 7から0 proleneはIVCを連結するために使用されます。 </li><li>開腹部位は、2層方式で閉じられます。当研究室では、腹壁を閉じるには、連続的なパターンで5〜0 vicryl、合成縫合糸を、使用しています。接着剤の皮膚接着剤は、皮膚を閉じるために使用されます。除去するための外付縫合糸はありません。 </li><li>マウスはその後、個々のマウスのケージ中に回収され、加熱ランプ（最小距離 - 24インチ離れてケージから）下（2時間まで45分）手術後に観察された、その後、元の住宅に戻った。それは研究目的に干渉していない場合の鎮痛薬と抗炎症剤を用いることができる。科学的な鎮痛剤を差し控えることを正当化、獣医、そしてICUCAの承認が必要とされています。当研究室では、ブプレノルフィン、0.05〜0.1 mg / kgのSQは、マウスのための優秀なプリと術後の鎮痛剤であることを見出した。全身鎮痛薬は、実験結果を混乱させる可能性がある場合に加えて、4mg/kgでのリドカインは、（0.4 mlの1％溶液の/ kg）の切開部位に注入することができます。 </li><li> IVCあるいは排水枝を結紮または焼灼されていない場合を除き、各実験群から偽の動物は、外科的アプローチのために使用される上記の解剖​​を受ける。 </li><li>安楽死は、げっ歯類のための安楽死についてアメリカ獣医学協会のガイドラインで定められている勧告に従って行われます。 </li></ol>

<ol><li>Naess, I. A., Christiansen, S. C., Romundstad, P., Cannegieter, S. C., Rosendaal, F. R., Hammerstrom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+and+mortality+of+venous+thrombosis%3A+a+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Incidence and mortality of venous thrombosis: a population-based study.</a> J Thromb Haemost. 5, 692-699 (2007).</li>
<li>White, R. H., Keenan, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+race+and+ethnicity+on+the+incidence+of+venous+thromboembolism%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of race and ethnicity on the incidence of venous thromboembolism.</a> Thromb Res. 123, Suppl 4. S11-S17 (2009).</li>
<li>Heit, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+venous+thromboembolism+in+the+community%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of venous thromboembolism in the community.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, 370-372 (2008).</li>
<li>Henke, P. K., Varga, A., De, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+vein+thrombosis+resolution+is+modulated+by+monocyte+CXCR2-mediated+activity+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Deep vein thrombosis resolution is modulated by monocyte CXCR2-mediated activity in a mouse model.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24, 1130-1137 (2004).</li>
<li>McDonald, A. P., Meier, T. R., Hawley, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+is+associated+with+impaired+thrombus+resolution+in+a+mouse+model+of+stasis+induced+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Aging is associated with impaired thrombus resolution in a mouse model of stasis induced thrombosis.</a> Thromb Res. 125, 72-78 (2010).</li>
<li>Myers, D., Farris, D., Hawley, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selectins+influence+thrombosis+in+a+mouse+model+of+experimental+deep+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis.</a> J Surg Res. 108, 212-221 (2002).</li>
<li>Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P-selectin+and+leukocyte+microparticles+are+associated+with+venous+thrombogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis.</a> J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).</li>
<li>Myers, D. D. J. r, Rectenwald, J. E., Bedard, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+venous+thrombosis+with+an+oral+inhibitor+of+P+selectin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Decreased venous thrombosis with an oral inhibitor of P selectin.</a> J Vasc Surg. 42, 329-336 (2005).</li>
</ol>

利害の衝突は宣言されません。

下大静脈血栓症のマウス完全な停滞のモデルは、さまざまな年齢のマウスの複数の株に行うことができます。モデルは、最も重量の少なくとも20グラムのマウスに適しています。静脈血栓症のこの動物モデルは、研究者が静脈の壁と閉塞性静脈血栓の間に炎症性の相互作用を研究することができます。我々の経験から、我々は各群10匹以上の動物が血栓重み、静脈壁の炎症細胞数、静脈壁タンパク質、静脈壁の遺伝子発現、および活動のための全血または血漿分析のためにグループ間で統計的有意性を得るために必要とされることを発見したアッセイ。

<table border="1"><tbody><tr><td> 消耗品と備品 </td></tr><tr><td>イソフルランガス</td></tr><tr><td> Prolene 7から0縫合</td></tr><tr><td> Vicryl 5から0縫合</td></tr><tr><td>皮膚接着剤</td></tr><tr><td>眼潤滑</td></tr><tr><td> Nolvasanソリューションまたは静菌ソリューション</td></tr><tr><td>実体顕微鏡スコープ</td></tr><tr><td> MediCapture </td></tr><tr><td>コットンアプリケーター</td></tr><tr><td> 2 × 2ガーゼ</td></tr><tr><td>暖房パッド</td></tr><tr><td>麻酔器</td></tr><tr><td>ガラスビーズ器具消毒器</td></tr><tr><td>マイクロ手術器具</td></tr><tr><td>腹部Restrainers </td></tr></tbody></table>

下大静脈血栓症のマウス完全な停滞のモデル

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

静脈血栓塞栓症（VTE）は、深部静脈血栓症（DVT）と肺塞栓症（PE）の両方が含まれています。米国（US）、高い罹患率と死亡率に率は深刻な健康上の懸念1-2 VTE行う。心臓病と脳卒中の後に、VTEは番目の最も一般的な血管疾患の3です。単独で米国では、毎年影響を推定90万人は30万の死亡は毎年3を発生すると、そこにあります。この病気のメカニズムを研究するためのin vivo動物モデルでの信頼性が必要です。 下大静脈血栓症のマウス完全なうっ滞モデルを使用する利点はいくつかある。マウスモデルでは、劇的にコストを削減し、限られた可用性のテストエージェントの非常に小さなボリュームの管理が可能になります。最も有望な特定の炎症と凝固因子の機能が線引きされるように遺伝子ノックアウトによるマウスの可能性があります。現在の分子アッセイは、静脈の壁、血栓、全血、及びアッセイのためのプラズマの定量を可能にする。しかし、このモデルを含む主要な関心事は、手術のサイズの制約と血管のもろさです。また、小さなIVCのサンプル重量（0.005グラムを意味する）に起因するそれは、このようなリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（RT - PCR）、ウェスタンブロットなどの動物の組織のための正確な統計分析のための番号、血栓、および血アッセイを大きくする必要がある酵素結合免疫吸着法（ELISA）、ザイモグラフィー、静脈壁および血栓細胞の解析、および全血と血漿アッセイ4-8。 うっ滞モデルの大きな欠点は、血流の不足が血栓と静脈の壁に投与する全身治療薬の最大効果を阻害することです。

下大静脈血栓症のマウス完全なうっ滞モデルは、静脈壁の組織と血栓の定量化可能な量が得られます。それは静脈壁と閉塞性血栓の間に、急性から慢性の炎症への進行を評価する上での相互作用を評価するために役立っています。

静脈血栓塞栓症（VTE）には、深部静脈血栓症（DVT）と肺塞栓症（PE）の両方が含まれます。米国（U.S.）では、高い罹患率および...

この手順の全体的な目的は、下大静脈（IVC）を結紮して完全なうっ滞を引き起こし、血栓を形成させることで、血栓形成とその解像度を研究することです。まず、腹側正中切開によってIVCを露出させます。次に、背面および側面に向かうすべての流出枝を特定し、焼灼または結紮します。次に、腎静脈より下側で下大静脈（IVC）を大動脈から分離し、結紮します。最後に、分子生物学的評価のため、さまざまな時点でIVCと血栓を採取します。これにより、最終的に、6日目までの血栓負荷の程度を示す結果を得ることができます。下大静脈結紮のマウスモデルは、遺伝子欠損マウスの研究を行うために当研究室で開発されました。本プロトコルの実行には顕微外科的手法が必要であり、手順の習得が困難であるため、この手術モデルを視覚的に示すことは極めて重要です。まず、5% isof fluorineおよび100% oxygenを0.5 liters per minuteの流量で導入する術前麻酔導入チャンバー内で、動物を麻酔します。動物をチャンバーから取り出し、仰向けに固定して、電気バリカンで腹部を剃毛します。次に、動物の体重を測定します。その後、滅菌眼軟膏で眼を潤滑します。イソフルランと酸素による全身麻酔下で、動物を温水加熱パッドの上に仰向けに固定します。腹部をクロルヘキシジン溶液でスプレーし、滅菌ガーゼで拭き取ります。手術を開始するため、手術部位が清潔になるまで腹部を消毒します。アイリスシザーを用いて、皮膚および腹壁に腹側正中切開を加え、生理食塩水に浸した滅菌ガーゼを使用して腹部を露出させます。動物の腸管を左側に寄せます。マウス固定具を使用して、下大静脈（CVAまたはIVC）を露出させます。この段階から手術の終了まで、2% isof fluorine、100% oxygenを0.2 liters per minuteの速度で投与し、麻酔を維持します。滅菌綿棒と極細アイリス組織鉗子を用い、腹膜筋膜を鈍的に剥離して、IVCおよびそのすべての分枝を露出させます。まず、腎静脈から腸骨分岐までの中下大静脈（IVC）のすべての後枝を焼灼します。次に、側枝を7-0非吸収性プロリン縫合糸で結紮します。腎静脈の直下でIVCを大動脈から分離します。7-0 proline縫合糸を用いて下大静脈（IVC）を結紮します。5-0 Vicryl合成縫合糸を用いて腹壁を閉鎖します。その後、皮膚用接着剤を塗布して皮膚を閉鎖します。回復ケージ内で保温ランプを用いて動物を観察した後、元の飼育ユニットに戻します。この解析では、安楽死時点におけるコントロールマウスと、IVC結紮および血栓症を処置した動物を比較します。2日目または6日目に、IVC血栓および関連する静脈壁を摘出し、重量を測定しました。血栓重量の測定により、血栓形成の程度および時間の経過に伴うその消失度を記録することができます。これは、内皮細胞の活性化に関連した炎症イベントの指標となります。また、この測定は、治療薬が炎症および静脈壁の血栓量を減少させる上でどの程度有効であるかを示す有用な指標となります。ここでは、下大静脈（IVC）を大動脈と共に摘出しました。パラフィン包埋切片をスライドに貼付し、ヘマトキシリン・エオジン染色を施した。このグラフは、対照群と実験群のマウス組織における多形核白血球（PMN）の数を示している。静脈壁の炎症細胞集団の測定は、正常な動物において静脈血栓が存在する場合の、静脈壁における自然な急性から慢性への炎症反応を記録するために用いられる。2日目の急性炎症反応では、主に好中球が認められるはずである。この図に示されているように、感染がない場合、静脈壁の好中球数は2日目以降に減少するはずです。これは、我々の静脈血栓症マウスモデルにおける結果です。ここでは、静脈壁の単球数を比較しています。より亜急性と慢性の静脈壁炎症反応では、増加が見られます。静脈壁の単球集団において、単球は蛋白分解酵素を分泌し、これが静脈血栓の自然な消退を促進することが示されています。感染がない場合、時間の経過とともに解消されます。このビデオにより、当社のIVC結紮モデルの実施方法について十分に理解できたはずです。このモデルは、血栓形成および時間の経過に伴う血栓の消退を研究するのに適しています。

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下大静脈血栓症のマウス完全な停滞のモデル

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