Name: 高分子 - リガンド親和性を測定するための等温滴定カロリメトリー (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-07T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 45 s
Description: 学ぶ等温滴定カロリメトリー（ITC）による高分子とリガンドの結合熱力学測定法。大腸菌ジヒドロ葉酸還元酵素とNADPHを用いた実験手順とデータ解析について解説し、結合親和性と熱力学的パラメータの決定方法を示す。

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<ol><li>Wiseman, T., Williston, S., Brandts, J. F., Lin, L. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+measurement+of+binding+constants+and+heats+of+binding+using+a+new+titration+calorimeter%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Rapid measurement of binding constants and heats of binding using a new titration calorimeter.</a> Anal. Biochem. 179, 131-137 (1989).</li>
<li>Jelesarov, I., Bosshard, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isothermal+titration+calorimetry+and+differential+scanning+calorimetry+as+complementary+tools+to+investigate+the+energetics+of+biomolecular+recognition%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Recognit%22%5BJournal%5D)">Isothermal titration calorimetry and differential scanning calorimetry as complementary tools to investigate the energetics of biomolecular recognition.</a> J. Mol. Recognit. 12, 3-18 (1999).</li>
<li>Velazquez-Campoy, A., Leavitt, S. A., Freire, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+protein-protein+interactions+by+isothermal+titration+calorimetry%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Characterization of protein-protein interactions by isothermal titration calorimetry.</a> Methods Mol. Biol. 261, 35-54 (2004).</li>
<li>Turnbull, W. B., Daranas, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+value+of+c%3A+can+low+affinity+systems+be+studied+by+isothermal+titration+calorimetry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">On the value of c: can low affinity systems be studied by isothermal titration calorimetry.</a> J. Am. Chem. Soc. 125, 14859-14866 (2003).</li>
<li>Fukada, H., Takahashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enthalpy+and+heat+capacity+changes+for+the+proton+dissociation+of+various+buffer+components+in+0.1+M+potassium+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22Proteins%22%5BJournal%5D)">Enthalpy and heat capacity changes for the proton dissociation of various buffer components in 0.1 M potassium chloride.</a> Proteins. 33, 159-166 (1998).</li>
<li>Houtman, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studying+multisite+binary+and+ternary+protein+interactions+by+global+analysis+of+isothermal+titration+calorimetry+data+in+SEDPHAT%3A+application+to+adaptor+protein+complexes+in+cell+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">Studying multisite binary and ternary protein interactions by global analysis of isothermal titration calorimetry data in SEDPHAT: application to adaptor protein complexes in cell signaling.</a> Protein Sci. 16, 30-42 (2007).</li>
<li>Bradrick, T. D., Beechem, J. M., Howell, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unusual+binding+stoichiometries+and+cooperativity+are+observed+during+binary+and+ternary+complex+formation+in+the+single+active+pore+of+R67+dihydrofolate+reductase%2C+a+D2+symmetric+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Unusual binding stoichiometries and cooperativity are observed during binary and ternary complex formation in the single active pore of R67 dihydrofolate reductase, a D2 symmetric protein.</a> Biochemistry. 35, 11414-11424 (1996).</li>
<li>Shenoy, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multisite+and+multivalent+binding+between+cyanovirin-N+and+branched+oligomannosides%3A+calorimetric+and+NMR+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Biol%22%5BJournal%5D)">Multisite and multivalent binding between cyanovirin-N and branched oligomannosides: calorimetric and NMR characterization.</a> Chem. Biol. 9, 1109-1118 (2002).</li>
<li>Chopra, S., Lynch, R., Kim, S. H., Jackson, M., Howell, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+temperature+and+viscosity+on+R67+dihydrofolate+reductase+catalysis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Effects of temperature and viscosity on R67 dihydrofolate reductase catalysis.</a> Biochemistry. 45, 6596-6605 (2006).</li>
<li>Norris, A. L., Serpersu, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+of+Coenzyme+A+with+the+Aminoglycoside+Acetyltransferase+%283%29-IIIb+and+Thermodynamics+of+a+Ternary+System%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Interactions of Coenzyme A with the Aminoglycoside Acetyltransferase (3)-IIIb and Thermodynamics of a Ternary System.</a> Biochemistry. 49, 4036-4042 (2010).</li>
<li>Falconer, R. J., Penkova, A., Jelesarov, I., Collins, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survey+of+the+year+2008%3A+applications+of+isothermal+titration+calorimetry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Recognit%22%5BJournal%5D)">Survey of the year 2008: applications of isothermal titration calorimetry.</a> J. Mol. Recognit. 23, 395-413 (2010).</li>
<li>Ababou, A., Ladbury, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survey+of+the+year+2005%3A+literature+on+applications+of+isothermal+titration+calorimetry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Recognit%22%5BJournal%5D)">Survey of the year 2005: literature on applications of isothermal titration calorimetry.</a> J. Mol. Recognit. 20, 4-14 (2007).</li>
<li>Buurma, N. J., Haq, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+analysis+of+isothermal+titration+calorimetry+data+for+ligand-DNA+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Advances in the analysis of isothermal titration calorimetry data for ligand-DNA interactions.</a> Methods. 42, 162-172 (2007).</li>
<li>Salim, N. N., Feig, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isothermal+titration+calorimetry+of+RNA%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Isothermal titration calorimetry of RNA.</a> Methods. 47, 198-205 (2009).</li>
<li>De, M., You, C. C., Srivastava, S., Rotello, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomimetic+interactions+of+proteins+with+functionalized+nanoparticles%3A+a+thermodynamic+study%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Biomimetic interactions of proteins with functionalized nanoparticles: a thermodynamic study.</a> J. Am. Chem. Soc. 129, 10747-10753 (2007).</li>
<li>Velazquez-Campoy, A., Freire, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isothermal+titration+calorimetry+to+determine+association+constants+for+high-affinity+ligands%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isothermal titration calorimetry to determine association constants for high-affinity ligands.</a> Nat. Protoc. 1, 186-191 (2006).</li>
<li>Velazquez Campoy, A., Freire, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ITC+in+the+post-genomic+era...%3F+Priceless%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+Chem%22%5BJournal%5D)">ITC in the post-genomic era...? Priceless.</a> Biophys. Chem. 115, 115-124 (2005).</li>
<li>Harries, D., Rau, D. C., Parsegian, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solutes+probe+hydration+in+specific+association+of+cyclodextrin+and+adamantane%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Solutes probe hydration in specific association of cyclodextrin and adamantane.</a> J. Am. Chem. Soc. 127, 2184-2190 (2005).</li>
<li>Chervenak, M. C., Toone, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+direct+measure+of+the+contribution+of+solvent+reorganization+to+the+enthalpy+of+binding%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">A direct measure of the contribution of solvent reorganization to the enthalpy of binding.</a> J. Am. Chem. Soc. 116, 10533-10539 (1994).</li>
<li>Taneva, S. G., Moro, F., Velazquez-Campoy, A., Muga, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Energetics+of+nucleotide-induced+DnaK+conformational+states%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Energetics of nucleotide-induced DnaK conformational states.</a> Biochemistry. 49, 1338-1345 (2010).</li>
<li>Jelesarov, I., Bosshard, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermodynamics+of+ferredoxin+binding+to+ferredoxin%3ANADP%2B+reductase+and+the+role+of+water+at+the+complex+interface%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Thermodynamics of ferredoxin binding to ferredoxin:NADP+ reductase and the role of water at the complex interface.</a> Biochemistry. 33, 13321-13328 (1994).</li>
<li>Burrows, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+the+monomer-dimer+equilibrium+of+interleukin-8+reveals+it+is+a+monomer+at+physiological+concentration%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Determination of the monomer-dimer equilibrium of interleukin-8 reveals it is a monomer at physiological concentration.</a> Biochemistry. 33, 12741-12745 (1994).</li>
<li>Baker, B. M., Murphy, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+linked+protonation+effects+in+protein+binding+reactions+using+isothermal+titration+calorimetry%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Evaluation of linked protonation effects in protein binding reactions using isothermal titration calorimetry.</a> Biophys. J. 71, 2049-2055 (1996).</li>
</ol>

利害の衝突は宣言されません。

ITCは、11は蛋白質-リガンド、12 DNA -配位子13とRNA -高分子を見て研究14の研究で、リガンド高分子の相互作用の研究に広く使用されています。 ITCは、さらに均一な懸濁液を形成するようなナノ粒子等の固体材料を、、で実行することができます。つのリガンドが既に巨大分子と第2のリガンドに結合している15さらに、三元系システムは、滴定、熱力学を決定するために使用することができる、のために弱い結合の例、酵素補因子のシステムへの基質の結合7研究も通常より弱い結合リガンドとの競合結合アッセイを行うことにより、ITCの検出限界を超えてしまう非常に高い結合親和性を持つ分子に対して実行することができます。16情報リガンドはまた、競合アッセイによって得ることができます。17が結合における水の役割は、溶媒の再編成に関するエンタルピーの依存性とともにITC、18によって探索することができます。19は最近、DNAK変異体のコンフォメーション変化の熱力学があるのは結合時に測定したADPとATP 20タンパク質-タンパク質の関連付けはITCが調査することができる、ホモ関連で同様のヘテロ複合体に関する情報21を得た。結合エンタルピーで22温度の効果は結合事象の熱容量を与える。2の数結合時に吸収または放出陽子はまた、イオン化の異なるエンタルピーとバッファで行われた実験から決定することができます。5つの追加ITCの研究は、異なるpH値で行われている場合は、関係するグループのpKaは潜在的に決定することができます。23 要約すると、高分子とリガンドの濃度の正確な測定が良いITCの実験のための不可欠です。サンプルの濃度はまた、信頼性の高いデータを得るために適切な範囲内にする必要があります。小分子の不純物とpHの不一致は、サーモグラムでアーティファクトが発生するので注意がバッファを用いる場合には注意が必要。

<table border="1"><tbody><tr><th>試薬の名前</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th></tr><tr><td>を1.7 mLマイクロ遠心チューブ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> 02-681-282 </td></tr><tr><td> 15 mLのファルコンチューブ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> 14から959 - 49B </td></tr><tr><td> 2.5mLのハミルトンシリンジ</td><td> MicroCal </td><td> SYN161714 </td></tr></tbody></table>

高分子 - リガンド親和性を測定するための等温滴定カロリメトリー

Isothermal Titration Calorimetry for Measuring Macromolecule-Ligand Affinity

等温滴定熱量測定（ITC）は、結合反応の完全な熱力学の絵を理解するための便利なツールです。生物学では、高分子の相互作用は、細胞の機械を理解する上で不可欠です。このようなバッファや温度などExperimental条件は、研究対象の特定のバインディングのシステムに合わせて調整することができます。特定のリガンドと高分子濃度範囲は、有用なデータを取得するために必要なので、しかし、慎重な計画が必要です。高分子とリガンドの濃度は正確に信頼性の高い結果を得るために決定する必要があります。ケアにも不純物が大幅に実験に影響を与えることができるようにサンプルを準備する際に注意が必要。このような化学量論、親和性やエンタルピーなどのコントロールと一緒にITCの実験は、、適切に実行される、有用なバインディング情報は、得られる。別のバッファまたは温度条件下での追加実験を実行することによって、より詳細な情報は、システムについて取得することができます。 ITCの実験の基本的なセットアップのためのプロトコルが与えられます。

中程度の結合親和性と生物系のための結合熱力学を監視するために等温滴定熱量計を使用するための一般的なプロトコルが表示されます。

等温滴定カロリメトリー（ITC）は、結合反応の完全な熱力学的像を理解するための有用なツールである。生物学的な...

本手順の全体的な目的は、等温滴定カロリメトリー（ITC）を用いてリガンドと高分子の結合を研究するための一般的な手法を提示することです。まず、不純物がなく、緩衝液組成およびpHの両方が一致したリガンド溶液と高分子溶液を調製します。その後、リガンド溶液と高分子溶液の最終濃度を決定します。次に、ITCの実験パラメータを設定し、データを収集します。手順の最終ステップは、データの解析とフィッティングです。最終的に、滴定データのグラフ解析を通じて、リガンドと高分子の相互作用を示す結果が得られ、結合パラメータおよび熱力学パラメータが決定されます。この結合技法が、吸光度や蛍光滴定などの既存の手法に比べて優れている主な点は、同一の実験から結合エンタルピー、およびそれに伴う結合エントロピーを決定できることです。サンプルの調製は、高分子とリガンドの両方の適切な濃度を決定することから始まります。正確なITCフィッティング情報を得るために不可欠な、これらの濃度計算時に考慮すべき重要なステップについては、記述形式の手順書に記載されています。このデモンストレーションでは、大腸菌（e coli）の染色体性ジヒドロ葉酸還元酵素へのコファクターN-A-D-P-Hの結合について検討します。まず、凍結乾燥された高分子をバッファーで目的の濃度に再構成し、次にリガンドを必要な量のバッファーに溶解します。次に、高分子およびリガンド試料のpH値が、バッファーおよび互いの値から±0.05 pH単位以内であることを確認します。染色体性ジヒドロ葉酸還元酵素とN-A-D-P-Hの両方の溶液をマイクロ遠心チューブに入れ、5分間遠心分離します。8,000から14,000 RPMで遠心分離を行うことで、溶液中の粒子を沈殿させます。これらの粒子はITCサーモグラムのベースラインにアーティファクトを引き起こす可能性があります。遠心分離後、UV-Vis分光法を用いて高分子およびリガンド溶液の濃度を注意深く確認し、正確な濃度を記録してください。次に、調製した高分子およびリガンドのストック溶液を必要な実験濃度に希釈し、各ITC溶液を適切な量まで調製します。最後に、高分子とリガンドをITCに充填する前に、気泡や滴定中の溶解ガスの放出による信号アーティファクトを避けるため、サンプルの脱気を行います。サンプルセルおよび注入用シリンジを、製造元のプロトコルに従って洗浄してください。次に、ハミルトンシリンジを用いて、サンプルセルを1.8 millilitersの蒸留水で2〜3回洗浄します。シリンジのチップが長く曲がりやすいため、取り扱いには十分注意してください。続いて、同量のバッファーでサンプルセルを数回洗浄します。サンプルセルを洗浄後、大分子溶液を1.8 millilitersセルに注入します。溶液がセルのステムから現れた時点で、気泡が形成されないよう注意してサンプルの注入を停止します。Hamiltonシリンジを用いて、ニードルをセルの側面に沿ってゆっくりと上下に動かし、気泡を除去します。シリンジを抜き、セルの上部にあるウェルから過剰な液量を排除します。次に、参照セルに蒸留水を満たします。その後、チューブを用いて注入シリンジの充填ポートにプラスチックシリンジを接続します。VP viewer 2000コンソールの充填ポートを開きます。注入用シリンジを蒸留水で洗浄し、続いてバッファーで洗浄します。システム内から空気を吸引し、注入用シリンジ内が完全に真空状態であることを確認してください。注入用シリンジの針をリガンド溶液に入れ、シリンジが完全に満たされるまで溶液を吸引します。ポート内にわずかに過剰な量を吸引し続け、充填ポートをすぐに閉じた後、チューブを外します。チューブとプラスチック製シリンジパージを取り外し、注入用シリンジ内で気泡を完全に除去するため、2回パージと再充填を行います。注入用シリンジをリガンド溶液から取り出し、側面についた液滴をchem wipeで拭き取ります。シリンジのチップをchem wipeに触れさせたり、シリンジに衝撃を与えたりしないよう注意してください。これにより、シリンジ内の容量が減少する可能性があります。次に、注入用シリンジを慎重にサンプルセルに設置します。Micro Cal社より提供されているV VP viewer 2000プログラムを用いて、結合系のITC実行パラメータを設定します。染色体ジヒドロ葉酸還元酵素N-A-D-P-H系のような強力な熱信号を伴う系では、少量の注入を回数多く行うことで、フィッティングに不可欠なデータポイントをより多く得ることができます。逆に、熱信号が弱い系では、大容量の注入を少回数行うことが好ましいです。最初の1回または2回の注入では、注入量を2 µLに設定してください。これらの注入は、リガンド溶液と高分子溶液の混合により不正確な結果が得られる可能性があるため、最終的に破棄されます。注入間隔を入力する際は、システムの平衡状態に達し、熱信号がベースラインに戻るまで数分間の時間を設けてください。次に、実験温度を選択し、滴定中のリガンドと高分子の十分な混合に必要なシリンジの攪拌速度を入力します。実験パラメータの設定後、実験を開始してください。実験終了時、最終的な熱信号が飽和に近い状態である必要があります。メーカーのプロトコルに従ってITCを洗浄し、再現性のあるデータを得るために、滴定を少なくとも1回または2回繰り返してください。最後に、サンプルセル内の緩衝液にリガンドを滴定するコントロール実験を行い、リガンドの希釈熱を決定します。データのフィッティングは、任意のデータフィッティングプログラムのマクロを使用して容易に行うことができます。ここでは、MicroCal社から提供されているOrigin 7を使用してデータフィッティングを実演します。まず、最初のデータファイルを読み込みます。未処理のサーモグラムを確認し、ベースラインにスパイクがある場合や、注入点がないにもかかわらずピークが現れるなど、気泡やその他のアーティファクトによる信号の乱れがないかを確認します。これらのデータポイントは除去する必要があるため、記録しておきます。次に、リガンド希釈コントロールデータを読み込み、この時点で結合等温線から差し引きます。滴定の初期段階で通常発生する希釈アーティファクトを含む、すべての不要なデータポイントを除去します。次に、データフィッティングモデルを選択します。モデルを選択後、化学量論、エンタルピー、結合親和性などのフィッティングパラメータの初期推定値を手動で入力し、データをフィッティングさせることができます。ただし、直交実験などの事前知識からいずれかのパラメータが判明している場合は、フィッティング中にデータが局所的な極小値（ローカルミニマム）に陥るのを防ぐため、それらの値を入力してください。最初のタイトレーションのデータフィッティングが完了したら、残りの等温線についても同様のデータ解析手順を繰り返します。あるいは、said fatのようなプログラムを使用してデータをグローバルフィッティングさせることも可能です。グローバルフィッティングを開始するには、Originでデータを.datファイルとして保存してください。その後、データを当該のソフトウェアにインポートします。フィッティング用のモデルを選択し、データのグローバルフィッティングを行います。グローバルχ²（カイ二乗）値が最小になるまで、simplex法と Marquardt-Levenberg法のフィッティングオプションを交互に切り替えて調整してください。このビデオで実演している代表的なITCの手順では、E. coli染色体由来ジヒドロ葉酸還元酵素へのNADP-Hの結合をモニターしています。N-A-D-P-Hのジヒドロ葉酸還元酵素への結合が発熱的であることは、熱が放出される未処理のサーモグラムから明らかです。注入を繰り返すごとに熱信号が減少していることは、結合の飽和を示しており、これはタイトレーションの前半で起こっています。成分の純度および緩衝液の良好な整合性は、リガンドの希釈熱による最小限の熱信号のみが見られるプロットの飽和領域から確認できます。Originソフトウェアを用いてデータを単一サイトモデルにフィッティングし、結合等温線を明らかにしました。その後、2つのデータセットを同モデルにフィッティングさせました。残差の値が小さくランダムなパターンを示していることから、熱力学的パラメータは妥当であると考えられます。また、これらのパラメータは、直交する方法で得られた文献値との比較によっても検証されています。このビデオを視聴することで、溶液の適切な調製、実験パラメータの設定、およびデータ解析を行い、Micro社のVP ITCを用いてリガンドとマクロ分子の結合を研究する方法について、十分に理解することができます。

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

ITCは、そのホストへのリガンドの結合を研究するための強力なツールです。複雑なシステムではしかし、いくつかのモデルも同様にデータをフィットすることがあります。ここで説明する方法は、複雑なシステムのための適切な結合モデルを解明し、対応する熱力学的パラメータを抽出する手段を提供します。...

バインディング機構を決定するために、可変濃度等温滴定熱量計のデータセットの収集

このビデオでは、生体分子とリガンドの相互作用を研究する手法である示差走査熱量測定を実演しています。DNAアプタマーと熱不安定性リガンドの結合は、サンプルに加熱と冷却のサイクルを繰り返し適用し、熱力学分析のためのスキャンを取得することによって研究されます。...

DNAアプタマー-熱不安定性リガンド相互作用を研究するための示差走査熱量測定

熱流が化学反応で放出又は吸収等温滴定熱量測定する。この方法は、酵素触媒作用を定量化するために使用することができる。本論文では、楽器の設定、実験の実行、およびデータ分析のためのプロトコルは、一般的に説明されており、ナタマメウレアーゼによる酵素尿素加水分解の評価に適用。...

ホット生物触媒：等温滴定熱量測定酵素反応を特徴づけるために

示差走査蛍光法は、タンパク質との相互作用について低分子のライブラリをスクリーニングするために広く使用されている方法です。ここでは、これらの分析を拡張して、低分子とそのタンパク質パートナーとの間の解離定数を推定する簡単な方法を紹介します。...

示差走査蛍光光度を用いたタンパク質 - リガンド相互作用の定量

折りたたみと結合差動スキャン熱量測定による不耐熱配位子との相互作用は生体分子の迅速な評価のためのプロトコルを提案します。...

急速に折りたたみと結合の相互作用を特徴付ける不耐熱配位子を持つ生体分子 DSC プロファイルを測定

Elisa 法の滴定を実行する詳細なプロトコルを説明します。また、滴定 Elisa を評価し、マイクロタイター...

受容体リガンドの相互作用の解離定数の決定法として elisa 法の滴定

酵素の熱安定性は、等温滴定型熱量計 (ITC) によって容易に測定されます。ほとんどの蛋白質の安定性の試金は現在メジャー タンパク質の変性を使用、酵素活性についての情報を提供しません。ITC...

等温滴定熱量測定による酵素の安定性を測定

マイクロスケール熱泳動は、低い材料コストで結合定数を迅速に取得します。標識または標識フリーマイクロスケール熱泳動のいずれかが市販されている;しかしながら、標識フリーの熱泳動は、蛍光標識を用いて行うことができる多様な相互作用測定が可能ではない。当社は、標識熱泳動測定のためのプロトコルを提供しています。...

タンパク質-脂質相互作用を測定するためのマイクロスケール熱泳動の使用

この記事では、電子吸収分光法と等温滴定熱量測定を使用して、ペプチドおよびタンパク質に結合するCu(II)の熱力学をプローブおよび定量することに焦点を当てます。...

発色団の存在下および非存在下におけるCu(II)とペプチド残基間の結合相互作用の定量化

本プロトコルは、等温滴定熱量測定(ITC)を使用して、DNAアプタマーとテトラサイクリンの間の結合の会合および解離速度論を分析し、サンプル調製、標準およびサンプルの実行、および結果のデータの解釈を含むことを説明しています。...

等温滴定熱量測定を用いたDNAアプタマーとテトラサイクリンの熱力学的および速度論的会合の決定(英語)

学ぶ等温滴定カロリメトリー（ITC）による高分子とリガンドの結合熱力学測定法。大腸菌ジヒドロ葉酸還元酵素とNADPHを用いた実験手順とデータ解析について解説し、結合親和性と熱力学的パラメータの決定方法を示す。

高分子 - リガンド親和性を測定するための等温滴定カロリメトリー

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