盲腸結紮穿刺手順
May 7th, 2011
人間の敗血症の研究のための貴重なツールとして、盲腸結紮穿刺のマウスモデル。
こんにちは、テンプル大学微生物学・血液学部のデナ博士研究室のミゲル・トスカーノと申します。今日は、C 57 Black Seas Mouse株でiCalの主張とパンクチャモデルを設定する方法を紹介します。私たちの研究室では、このモデルを使用してヒトの敗血症を模倣しています。
基本的に、このモデルは、腹腔への糞便物質の放出を可能にし、多微生物性敗血症を引き起こし、したがって悪化した免疫応答を生成する血清の穿刺で構成されています。このモデルでは、多くの臓器と異なる細胞タイプが不可逆的に損傷を受けます。それは最終的に動物の死を引き起こす可能性があります。
それでは始めましょう。マウスに麻酔をかけます。最初のステップは、腹腔内注射による動物への麻酔です。
混合物、ケトミンとキシラジンの1対1。ネズミに噛まれないように、彼を傷つけないように、片手で尻尾からネズミをつかむ必要があります。もう一方の手で、床に押し戻します。
次に、後頭部からマウスをつかみ、動物を仰向けにして腹部を露出させることができます。29ゲージのインスリン注射器を使用して、腹腔内に20〜30マイクロリットルの麻酔を注入します。マウスの処置の準備をし、マウスの裏をつかみ、マウスの尾や脚を押して腹部を剃ります。
マウスが痛みに敏感でないことを確認し、腹部を消毒します。最初にベタジン溶液でこすり洗いし、次にイソプロピルアルコールワイプで少なくとも1分間拭きます。開腹術の練習開腹術を練習するには、鉗子で腹部の中央の皮膚を持ち上げ、長さ約1センチの小さな切開を行います。
次に、会陰を持ち上げ、腹腔を露出させるために別の小さな切開を練習します。湾曲した鉗子を使用して、腹膜を保持します。盲腸を腹膜に通すことにより、盲腸を特定して露出させます。
腹部の上に置きます。今が結紮の瞬間です。これは重要な要素です。
モデルの重大度を決定するために、手順の重大度を調整できます。結紮の延長により、マウスはより軽度の敗血症を発症します。結紮が盲腸の終わりに近づくと、中等度の敗血症が中央に行われると中悪性度の敗血症になり、回盲弁の近くで行われると重度の敗血症になると、手順の重症度は死亡率に反映されます。
回盲弁を結紮しないでください。次に、絹の縫合糸を使用して二重結び目で結紮を行い、穿刺を行います盲腸を保持し、結紮部位の近くに慎重に穿刺を行い、盲腸の端に近づいて別の穿刺を行います。secumの膜は柔らかく、非常に簡単に穴が開けられます。
太さの異なる針を使用し、1つまたは2つのミシン目を作ることで、モデルの厳しさを調整することもできます。ここに示すシングルまたはダブルパンクチャー法は、古典的なスルーおよびスルーシークエルパンクの代替技術です。シングルパンクまたはダブルパンク法を使用する利点は、彼らがエムを求めるときに押し出される糞便の量をより適切に制御できることです。
両方の指でセカムを持ち、セカムをそっと押し出して、ごく少量の糞便を抽出します。開腹術を閉じてから、腹膜を持ち上げ、盲腸を慎重に戻します。腹膜腔内。
盲腸の偶発的な刺し傷を避けるために細心の注意を払ってください 鉗子を使用すると、より大きな鉗子の使用をお勧めします。今こそ腹腔を閉じる時です。絹の縫合糸を使用して、それがしっかりと閉じていることを確認することが非常に重要です。
傷口の片側から始めて、結び目を作ります。前の穿刺のループの下に絹を通すことにより、反対側まで縫合糸を作り続けます。皮膚を閉じるには、ミッチェルの傷口クリップまたは右のツールを使用してリフレックスクリップを使用してクリップを閉じることができます。
傷が閉じていることを確認するために、必要な数のクリップを配置します。マウスを蘇生するには、1ミリリットルの予熱生理食塩水を皮下注射します。25ゲージの針を使用して、この輸液蘇生測定は敗血症の過動的段階を誘発し、手順を終了します。
マウスを赤外線加熱ライトの下に置くか、マウスが麻酔から回復するまで加熱パッドの上に置きます。ケージの床に餌と水を提供し、病気の兆候がないか8〜12時間ごとに動物を監視します。術後鎮痛のためにブプレノルフィンを皮下注射します。.
使用する別の鎮痛剤はT.トラマドールです。敗血症の兆候、敗血症の症状は、発熱、嗜眠、ペロ、勃起、下痢、身を寄せ合う、倦怠感です。非常に病気の動物は体温の深刻な低下を示し、苦痛を避けるためにほとんど動きません。
彼らはこの段階で安楽死させるべきです H.So これが私たちが鎌結紮と時間厳守モデルを実行する方法です。この手順のデモンストレーションを楽しんでいただき、動物研究を始める前に研究に非常に役立つことがわかったことを願っています。ライゲーションの長さ、針の太さ、穿刺回数を変更することにより、実験の適切な厳しさを確立するために、古いまたは未使用の頭脳をトレーニングに使用することを強くお勧めします。
そうは言っても、さようなら。
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概要
この記事では、ヒトの敗血症を研究するために使用される盲腸結紮穿孔マウスモデルについて説明します。このモデルは、腹腔に糞便を導入することで多菌種性敗血症をシミュレートし、過剰な免疫反応と潜在的な臓器損傷を引き起こします。
主要な研究要素
科学分野
- 微生物学
- 免疫学
- 動物モデル
背景
- 敗血症は感染症によって引き起こされる重度の医学的状態です。
- 動物モデルは敗血症のメカニズムを理解するために重要です。
- 盲腸結紮穿孔モデルはヒトの敗血症を効果的に模倣します。
- このモデルは免疫反応と臓器損傷の研究を可能にします。
研究の目的
- 盲腸結紮穿孔モデルのセットアップを示す。
- 敗血症研究におけるこのモデルの関連性を強調する。
- このモデルによって引き起こされる免疫反応に関する洞察を提供する。
使用された方法
- モデルにはC57BL/6マウスを使用します。
- 盲腸を穿孔して糞便を放出させます。
- 免疫反応と臓器損傷をモニタリングします。
- 処置後の動物の生存率を評価します。
主要な結果
- このモデルは多菌種性敗血症を成功裏に誘発します。
- マウスで顕著な免疫反応が観察されました。
- 臓器損傷が認められ、潜在的な死亡率につながりました。
- このモデルは敗血症研究に貴重なデータを提供します。
結論
- 盲腸結紮穿孔モデルは敗血症を研究するための貴重なツールです。
- これにより、研究者は免疫反応と臓器不全を調査することができます。
- さらなる研究により、敗血症のメカニズムの理解を深めることができます。
よくある質問
Executive Industry Relevance
The cecal ligation and puncture (CLP) model provides a reproducible, polymicrobial sepsis model that mirrors human pathophysiology, enabling target validation and mechanistic de-risking in early discovery. By reproducing both hyperdynamic and hypodynamic phases, it supports predictive confidence in therapeutic screening and translational biomarker identification. This model aids in assessing drug efficacy across disease stages, reducing late-stage failure risk in sepsis-related programs.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of immunological and physiological status across sepsis phases to validate therapeutic hypotheses.
- Operational Value: Supports functional target validation by modeling cytokine profiles and lymphocyte apoptosis relevant to human sepsis.
- Scientific Value: Facilitates pathway clarification through controlled induction of polymicrobial infection and organ damage readouts.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Generates quantifiable immune response and organ dysfunction metrics for assay standardization.
- Operational Value: Provides reproducible survival and physiological readouts enabling reliable compound evaluation.
- Scientific Value: Allows modulation of sepsis severity via ligation length, puncture number, and needle thickness for dose-response screening.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Models disease-relevant immune depression and nocosomial infection risk for translational biomarker alignment.
- Operational Value: Supports preclinical continuity by replicating clinical sepsis progression from hyperdynamic to hypodynamic phases.
- Scientific Value: Enables risk-adjusted advancement decisions through measurable outcomes like body temperature drop and lethargy.
Pipeline & Workflow Integration
The CLP model fits within the discovery continuum from target validation through lead identification to preclinical efficacy testing, particularly for immunomodulatory agents.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing by modeling systemic inflammatory response and immunosuppression phases.
- Screening: Delivers quantitative outputs such as cytokine levels, organ injury markers, and survival rates for compound comparison.
- Analytics: Enables statistical analysis of time-to-event and physiological parameters to assess treatment effects.
- Translational Research: Connects to preclinical validation via replicated human sepsis cytokine profiles and organ failure patterns.
- Enterprise Reuse: Serves as a reusable platform for sepsis mechanism probing and therapeutic screening across multiple campaigns.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Predictive confidence in target validation through phase-specific pathophysiological modeling.
- Operational Value: Standardization via controlled severity modulation and postoperative monitoring protocols.
- Strategic Value: Improved go/no-go decisions by capturing stage-dependent drug effects in sepsis.
- Portfolio Impact: Risk-adjusted prioritization based on model reproducibility and translational fidelity.
Implementation Considerations
- Requires expertise in aseptic surgical technique and rodent anesthesia.
- Dependent on instrumentation for ligation, puncture, and postoperative monitoring.
- Necessitates cross-team standardization of severity scoring and resuscitation protocols.
- Adaptation considerations include mouse strain, sex, and baseline health status.
- Practical limitations include variability in fecal extrusion and model mortality rates.
