Name: ハイスループットその場でハイブリダイゼーション法 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 24 s
Description: 学ぶハイスループットその場でハイブリダイゼーション法を用いて、胎児マウスの下部尿生殖路組織におけるmRNA発現パターンの可視化手法です。カスタマイズしたバスケットを使用し、低豊度から高豊度の転写産物まで検出可能で、発生生物学研究に応用できます。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

著者らは、組織のバスケットの準備に技術支援のために博士が蘭李、ニュージャージー州のがん研究所を、感謝したいと思います。この作品は、健康補助金DK083425とDK070219の国民の協会によって資金を供給された。

<ol><li>Cunha, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+possible+influence+of+temporal+factors+in+androgenic+responsiveness+of+urogenital+tissue+recombinants+from+wild-type+and+androgen-insensitive+%28Tfm%29+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Zoology%22%5BJournal%5D)">The possible influence of temporal factors in androgenic responsiveness of urogenital tissue recombinants from wild-type and androgen-insensitive (Tfm) mice.</a> Journal of Experimental Zoology. 205, 181-181 (1978).</li>
<li>Cunha, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormonal%2C+cellular%2C+and+molecular+regulation+of+normal+and+neoplastic+prostatic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Steroid+Biochemistry+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Hormonal, cellular, and molecular regulation of normal and neoplastic prostatic development.</a> Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology. 92, 221-221 (2004).</li>
<li>Price, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+aspects+of+development+and+structure+in+the+prostate%5BTitle%5D)+AND+%22National+Cancer+Institute+Monographs%22%5BJournal%5D)">Comparative aspects of development and structure in the prostate.</a> National Cancer Institute Monographs. 12, 1-1 (1963).</li>
<li>Cunha, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stromal-epithelial+interactions--I.+Induction+of+prostatic+phenotype+in+urothelium+of+testicular+feminized+%28Tfm%2Fy%29+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Steroid+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Stromal-epithelial interactions--I. Induction of prostatic phenotype in urothelium of testicular feminized (Tfm/y) mice.</a> Journal of Steroid Biochemistry. 14, 1317-1317 (1981).</li>
<li>Rozen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primer3+on+the+WWW+for+general+users+and+for+biologist+programmers%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Primer3 on the WWW for general users and for biologist programmers.</a> Methods in Molecular Biology. 132, 365-365 (2000).</li>
<li>Zhang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+greedy+algorithm+for+aligning+DNA+sequences%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Computational+Biology%22%5BJournal%5D)">A greedy algorithm for aligning DNA sequences.</a> Journal of Computational Biology. 7, 203-203 (2000).</li>
<li>Vezina, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dioxin+causes+ventral+prostate+agenesis+by+disrupting+dorsoventral+patterning+in+developing+mouse+prostate%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Dioxin causes ventral prostate agenesis by disrupting dorsoventral patterning in developing mouse prostate.</a> Toxicological Sciences. 106, 488-488 (2008).</li>
<li>Wilkinson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+messenger+RNA+by+in+situ+hybridization+to+tissue+sections+and+whole+mounts%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Detection of messenger RNA by in situ hybridization to tissue sections and whole mounts.</a> Methods in Enzymology. 225, 361-361 (1993).</li>
</ol>

利害の衝突は宣言されません。

方法ここで説明を使用して、それは間葉系パッド、尿路上皮、平滑筋、前立腺芽、射精管、および膣を含む胎児の雄と雌のマウスのLUTの主要な細胞型と組織区分のすべてのmRNAを検出することが可能である。このプロトコルで使用さ50μmのセクションでは、組織のアーキテクチャ（例えば、血管など）を解決するために十分な厚さという利点を持っていますが、一般的にホールマウントISH中に発生した方法論的問題であるプローブのトラッピングを、避けるために十分に薄いです。すべての新しいリボプローブは、染色前の発表された研究で評価されている陽性対照の組織、に評価される。我々は、染色パターンは、これらの組織に特異的であることを確認してください。提案手法のもう一つの利点は、複数のmRNAのパターンは同じLUTの組織から、隣接する組織切片で評価することができるということです。さらに、この方法は、細胞特異的タンパク質マーカーを視覚化し、ISHプロトコールで染色した細胞の種類を識別するために、免疫組織化学法と組み合わせて使用​​することができます。このメソッドは、ファストレッドまたはヘマトキシリン​​で核の対比染色として伝統的な対比の方法、互換性がありません。しかし、我々は、...

<table border="1"><tbody><tr><th>試薬の名前</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th></tr><tr><td>抗ジゴキシゲニン抗体、Fabフラグメント</td><td>ロシュダイアグノスティックス</td><td> 11214667001 </td></tr><tr><td>ブロッキング試薬</td><td>ロシュダイアグノスティックス</td><td> 11096176001 </td></tr><tr><td> BMパープルAP基質、沈澱</td><td>ロシュダイアグノスティックス</td><td> 11442074001 </td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> BP1600 - 100 </td></tr><tr><td>細胞培養用プレート、24ウェル</td><td>コー​​ニング</td><td> 3524 </td></tr><tr><td>ジゴキシゲニン11 - UTP </td><td>ロシュダイアグノスティックス</td><td> 1277073910 </td></tr><tr><td> dNTPの</td><td>ロシュダイアグノスティックス</td><td> 11969064001 </td></tr><tr><td>両刃のカミソリの刃</td><td>ウィルキンソンソード</td><td>古典的なモデル</td></tr><tr><td> Eliminase RNaseの除去</td><td> Decon研究所</td><td> 1102 </td></tr><tr><td>ホルムアミド</td><td>シグマ</td><td> F5786 - 1L </td></tr><tr><td>ゲル抽出キット</td><td>キアゲン</td><td> 28704 </td></tr><tr><td> H 2 Oにおけるグルタルアルデヒド、25％溶液</td><td>シグマ</td><td> G6257 - 100ML </td></tr><tr><td>ヘパリン、ナトリウム塩</td><td>シグマ</td><td> H3393 </td></tr><tr><td> H 2 O中の過酸化水素、30％溶液</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> BP2633 - 500 </td></tr><tr><td>レバミゾール</td><td>シグマ</td><td> L9756 </td></tr><tr><td>ロックタイト404クイックセットの瞬間接着剤</td><td>ヘンケル（株） </td><td> 46551 </td></tr><tr><td>マグネシウムの塩化</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> M33 - 500 </td></tr><tr><td>マレイン酸</td><td>シグマ</td><td> M0375 - 500G </td></tr><tr><td>マイクロ遠心チューブ、1.5mlの</td><td> Biologix調査会社</td><td> BP337 - 100 </td></tr><tr><td> Millicell培養プレートインサート</td><td>ミリポア</td><td> PICM01250 </td></tr><tr><td>分子研削樹脂</td><td> G -バイオサイエンス</td><td> 786 - 138PR </td></tr><tr><td>リン酸のパラホルムアルデヒド、4％溶液は、緩衝食塩水</td><td>アフィメトリクス</td><td> 19943 </td></tr><tr><td>リン酸塩は、Ca及びMgをすることなく、緩衝食塩水</td><td> MPのバイオメディカル</td><td> ICN1760420 </td></tr><tr><td>ポリエステルメッシュ、33ミクロン、12&quot;× 24&quot; </td><td>小さな部品株式会社</td><td> CMY - 0033 - D </td></tr><tr><td>プロテイナーゼKソリューション、20mg/ml </td><td> Amresco </td><td> E195 - 5mlの</td></tr><tr><td> QIAshredderカラム</td><td>キアゲン</td><td> 79654 </td></tr><tr><td> Qのソリューション</td><td>キアゲン</td><td> Taq DNAポリメラーゼに付属されています</td></tr><tr><td> RNaseの</td><td>シグマ</td><td> R6513 </td></tr><tr><td> RNase阻害剤</td><td>ロシュダイアグノスティックス</td><td> 03335399001 </td></tr><tr><td> RNeasyミニキット</td><td>キアゲン</td><td> 74104 </td></tr><tr><td> RNeasyミニキット</td><td>キアゲン</td><td> 74104 </td></tr><tr><td> RQ1 RNaseフリーのDNase </td><td>プロメガ</td><td> M6101 </td></tr><tr><td> SeaPlaque低融点アガロース</td><td>ロンザ</td><td> 50101 </td></tr><tr><td>ヒツジ血清</td><td>シグマ</td><td> S2263 - 500mLに</td></tr><tr><td> Stericupフィルタユニット、0.22μm、ポリエーテルスルホン、500ミリリットル</td><td>ミリポア</td><td> SCGPU05RE </td></tr><tr><td>粒状のアジ化ナトリウム、 </td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> S227I - 100 </td></tr><tr><td>ナトリウム塩化</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> BP358 - 212 </td></tr><tr><td>硫酸ドデシルナトリウム</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> S529 - 500 </td></tr><tr><td> SSC、20Xソリューション</td><td>研究プロダクツ国際</td><td> S24022 - 4000.0 </td></tr><tr><td>スーパースクリプトIII第一鎖合成システム</td><td>インビトロジェン</td><td> 18080-051 </td></tr><tr><td> T7 RNAポリメラーゼ</td><td>ロシュダイアグノスティックス</td><td> 10881767001 </td></tr><tr><td> Taq DNAポリメラーゼ</td><td>キアゲン</td><td> 201203 </td></tr><tr><td>トリス塩酸</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> BP153 - 1 </td></tr><tr><td>ツイーン20 </td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> BP337 - 100 </td></tr><tr><td>デラックスの試料槽と振動ミクロトーム</td><td>ライカマイクロシステムズ</td><td> VT1000A </td></tr><tr><td>酵母tRNA </td><td>ロシュダイアグノスティックス</td><td> 109495 </td></tr></tbody></table>

ハイスループットその場で</em胎児マウス下部尿生殖路のmrnaの発現パターンを特徴づける>ハイブリダイゼーション法

A High Throughput in situ Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

下部尿生殖路（LUT）の開発は複雑なプロセスです。この複雑さは、アンドロゲンシグナルと上皮-間葉相互作用の1,2に依存している胎児の男性の尿道から前立腺の形成の間に証明されています。前立腺の開発を担当する分子メカニズムを理解することは不適切にそのような良性前立腺肥大症や前立腺癌などの前立腺疾患を生じさせるために、その後の人生に呼び覚ますされている成長メカニズムを明らかにすることがあります。 開発LUTは、解剖学的に複雑です。出芽時の前立腺は16.5日後の構想（DPC）で始まることにより、多数の細胞タイプが存在する。血管系、神経や平滑筋は、間葉系間質3内に存在する。この基質は、多層上皮を囲み、アンドロゲン受容体依存性傍分泌シグナル4を介して胎児の前立腺を生じさせる。前立腺の開発とこれらの遺伝子に対応して前立腺管の上皮の形態は完全には理解されていないメカニズムのために必要な間質アンドロゲン受容体応答性遺伝子のアイデンティティ。正確に細胞の種類を識別し、それらの内の特定の因子の発現をローカライズする機能は、さらに前立腺の開発を理解することが不可欠です。in situハイブリダイゼーション （ISH）組織内のmRNAの局在化が可能になります。したがって、このメソッドは、それによって潜在的な前立腺の発達レギュレータの解明、シグナル分子とその受容体の発現のパターンとタイミングを識別するために使用することができます。 ここで、我々は、振動ミクロトームカットのセクションを使用して、胎児マウスのLUTでmRNAの発現パターンを識別するために、高スループットのISH法を説明します。このメソッドは、他のISHのプロトコルに比べていくつかの利点があります。スライドに付着した薄い切片上でISHを実行すると、技術的に困難であり、凍結切片やパラフィン切片の両方がしばしば弱い信号の解像度をもたらす間、凍結切片は、頻繁に悪い構造の品質を持っている。全体のマウント組織でISHを実行すると、プローブのトラッピングが発生する可能性があります。対照的に、私たちのハイスループット技術は、詳細な組織構造を明らかに分厚く切ったセクションを利用しています。修正されたマイクロチューブは、ISH手順の実行中にセクションを簡単に処理できます。 4 mRNAの転写産物の上限は、それによってコストと最大化効率を減少させる、一度の実行で検出された24のmRNA転写産物を最大で単一の17.5dpc LUTからスクリーニングすることができる。このメソッドは、それによってデータを解釈するための任意のバイアスを除去し、同じ単一のユニットとして処理される複数の治療群を可能にします。最も適切に前立腺の研究者のために、この方法では、前立腺管のネットワークを生じる胎児マウスの尿道が低く、高い多量のmRNA転写物の空間的、時間的な場所を提供します。

ここで、我々は、効率的な高スループットを記述<em&gt;その場で</em&gt;ハイブリダイゼーション（ISH）胎児マウスの前立腺組織切片を開発する際にmRNAの発現のパターンを可視化するための方法。方法は簡単に他のマウスの組織でまたは他の種から採取した組織中のmRNAの発現パターンを可視化するために適応させることができます。

ハイスループットその場で</em胎児マウス下部尿生殖路のmRNAの発現パターンを特徴づける>ハイブリダイゼーション法

下部尿路（LUT）の発達は複雑なプロセスです。この複雑さは、胎児期の男性における前立腺の形成過程において顕著に現れます。

本手順の目的は、発達中のマウス胎児の下部尿生殖器組織におけるmRNA発現パターンを視覚化することです。これは、まずPCRで生成したテンプレートからジゴキシゲニン標識リボプローブを合成することで達成されます。手順の第2ステップでは、振動ミクロトームを用いて厚切りの切片を作成します。第3のステップは、特注のバスケットに入れた下部泌尿生殖管切片を用いてin situハイブリダイゼーションを行うことです。リボプローブの結合を、BM purple沈殿性アルカリホスファターゼ基質を用いた免疫組織化学的検出により可視化します。最終的に、顕微鏡観察によって、胎生マウスの下部泌尿生殖管における低発現および高発現のmRNA転写産物の空間的および時間的な局在を示すことができます。免疫組織化学などの既存の手法に対するこの手法の主な利点は、リボプローブの作製が容易であり、マウスゲノム全体のほとんどのmRNAを認識するように作製できる点にあります。この方法は、マウス胎児の泌尿生殖器の発達過程におけるmRNA発現パターンの知見を提供しますが、他の器官系、種、および発達段階にも適用可能です。組織をアガーに埋め込む操作は習得が困難な場合があり、また、向きのわずかな違いが結果の不整合につながる可能性があるため、本手法を視覚的に提示することが極めて重要です。組織を準備する少なくとも1日前に、直径12mmのミリセル培養プレートから膜を取り除いて廃棄します。残ったリングは型として機能するため、RNase阻害剤溶液に一晩浸漬させておきます。プロトコル実施日に、段階的なメタノール置換で再水和させたマウスの下部泌尿生殖器を解剖します。PBS tweenで洗浄し、膀胱の約3分の2を廃棄して、残りの下部泌尿生殖器組織をPBS tweenに保存します。次に、処理済みのリングモールドをガラス顕微鏡スライドの上に置き、62 °Cに加熱した4%低融点アガロース溶液を満たし、約2分間冷却します。次に、下部泌尿生殖管組織をブロット乾式し、アガロース溶液に浸します。ピンセットを使用して組織を向き調整し、リングの上下の中間に吊るされた状態にします。アガロースが凝固するまで、4 °Cでインキュベートします。組織をスライスする前に、溶剤で洗浄し、続いて水で洗浄して、カスタマイズしたウィルキンソン刃を準備します。ダブルブレードを縦に2つのシングルブレードに分離します。次に、マイクロトーム刃でウィルキンソン刃を固定します。まず、マイクロトーム刃をウィルキンソン刃と同じ長さに切断します。次に、Lock Tite接着剤を用いて、切断端から約3～4 mmオフセットさせた位置でマイクロトーム刃をウィルキンソン刃に接着します。これで補強された刃を振動マイクロトームに取り付け、刃の角度を35度に設定します。バスにPBSを満たし、周囲を濡れた氷で囲んでデラックス標本バスを準備します。プラグに埋め込んだ組織をマウントする前に、リングモールドから取り出し、底面をブロック乾燥させます。次に、乾燥させた面をLoctite接着剤を用いてマウントディスクに接着します。ディスクを振動切片機に装着し、切片の厚さを50 micronsに、速度を2に、ブレードの振幅を4に調整します。組織切片を切り出しながら、鈍端ピンセットを用いて各切片を、0.5 mLの氷冷PBS tweenを満たした24ウェル培養プレートに移します。スライス後、in situ ハイブリダイゼーションを開始する前に、スプリングシザースを用いて各組織切片の周囲からアガロースの大部分を取り除きます。切片は、2 mMのアジ化ナトリウムを含むPBS tween中で、4 °Cで最大48時間まで保存可能です。まず、マイクロ遠心チューブの100 µLの印で底を切り取り、カスタムサンプルバスケットを作成します。チューブの切り取り部分を炎で加熱し、プラスチックが柔らかくなるまで温めます。次に、柔らかくなったプラスチックをメッシュ正方形の上にしっかりと押し付けます。硬化させ、余分なメッシュを切り落とします。加熱した18ゲージの針を使用して、各チューブの蓋に2つの穴を開け、バスケットを完成させます。24ウェルプレートの蓋に、等間隔に12 millimeterの穴を24個開けることで、サンプルバスケットを保持するトレイを作成します。各穴がウェルの真上に位置していることを確認した後、約1.3 cmの水道水を満たし、蓋をしたハイブリダイゼーションチャンバーを60.5 °Cに予熱し始めます。24ウェル培養プレートの各ウェルに2 mLのPBS tweenを加えて、in situ ハイブリダイゼーションを開始します。バスケットを装着した準備済みの蓋でこのプレートを覆います。次に、組織切片を室温でバスケットに移し、6%過酸化水素含有PBS tweenでロッキングインキュベートします。続いて、PBS tweenによる一連の洗浄、プロティーナーゼKによるインキュベーション、再度固定、およびさらなる洗浄を行います。サンプルの調製を完了させるため、各ウェルに2 mLのプレハイブリダイゼーション緩衝液を加え、プレートを加熱ハイブリダイゼーションチャンバー内で少なくとも1時間インキュベートします。各ウェルに0.5 µgの標識RIBA Probeを添加し、ハイブリダイゼーションを開始します。その後、加熱ハイブリダイゼーションチャンバー内で一晩インキュベーションを継続します。翌日、組織を溶液1で洗浄し、徐々に溶液2へと切り替えて洗浄した後、RNAで処理します。次に溶液3で洗浄し、続いてTBS Tweenおよび組織ブロッキングバッファーで洗浄し、組織を組織ブロッキングバッファー中でインキュベートします。インキュベーション期間後、抗dig抗体を抗体吸収バッファー中で4°Cで最低2時間インキュベートします。抗体溶液を10,000 RPMで1分間遠心分離します。不溶物を除去するため、抗体溶液バッファー2 mLにSennaを加えます。次に、組織をブロッキングバッファーから取り出し、調製した抗体溶液中でインキュベートします。手順の3日目には、ハイブリダイゼーションチャンバーに入れ、4 °Cで一晩保持します。その後、組織をTBSTで数回洗浄します。次に、ガラス製パステールピペットを用いて、組織を清潔なマイクロ遠心チューブに慎重に移します。1 mLのNTM溶液で組織を10分間洗浄します。次に、溶液をlava sole MBM purpleを含むTMTに置換します。チューブを暗所に置き、その後数日間にわたって色の発現を観察し、必要に応じて溶液を交換してください。完全に発色した後、組織をlava soleを含むTMTで短時間洗浄し、その後、パラホルムアルデヒドを含むPBS中で4°Cにて一晩インキュベートします。翌日に組織の漂白および洗浄を行います。これで切片のイメージング準備が整いました。下部尿路組織は、尿道の正中線がアロスプラグの平面と平行になるようにアガロースに包埋されました。この方向で切断することで、正中断面が得られました。特製のサンプルバスケットを用いることで、繊細な組織切片を埃や粒子状物質から保護しました。これは数日間にわたるC2ハイブリダイゼーションの手順中に行われました。また、これにより切片の脱落を防ぎました。低発現のmRNAを検出するために必要な長時間のインキュベーションにおいて、バックグラウンド染色の抑制は困難な課題です。しかし、アジ化ナトリウムの添加とそれに続くろ過によって、バックグラウンド染色の抑制が可能になったと考えられます。さらに、サンプルを呈色溶液で長時間インキュベートしても、バックグラウンド染色の可視的な差は見られませんでした。この手法に習熟すれば、適切に実施することで6日間で完了させることができます。本手順の後、免疫組織化学などの他の手法を用いて、mRNAの発現パターンがタンパク質の発現パターンと相関しているかを確認することが可能です。このビデオを視聴することで、マウスの下生殖器管の発達におけるmRNAの発現パターンの可視化方法について、十分に理解することができます。

a-high-throughput-situ-hybridization-method-to-characterize-mrna

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

全体のマウント<em&gt;上皮内</emE11.5マウス胚へのE8.5&gt;ハイブリダイゼーション

発展途上のマウス脳への遺伝子導入法は、ユニークな手術法と電極の特殊な形状を用いて記述されます。このユニークな手法は、脳の発達の研究に多くの神経科学者を支援する時間的および空間的にプラスミドDNAのトランスフェクションすることができます。...

マウス子宮内でエレクトロポレーション：制御時空間遺伝子導入

心臓の発達に影響を与える遺伝的変化を検討する際に、胎児および周産期死亡は、一般的な機能です。高周波超音波イメージングは​​、2次元の解像度を向上しており、早期に心臓の開発に優れた情報を提供することができますし、死亡前に心臓の構造と機能に及ぼす影響を検出するための理想的な方法です。...

ネズミの胎児心エコー検査

超高周波超音波小動物における心臓の異常を調べるための強力なライブイメージングツールです。その非侵襲性は、胚の生理的な状態を維持することができます。ここで、我々は子宮内で E18.5で胚の心拍数を測定するためのM-モード超音波を使用することを示している。...

非侵襲Mモード心エコー検査によるマウスでの心拍数の子宮内測定で

このプロトコルは、マウス着床前胚において系統の仕様を研究するために、タンパク質発現のin situ分析 、定量的、単一のセルを実行するための方法を提示します。胚盤胞のコレクションのために必要な手順、全マウント免疫蛍光タンパク質の検出、共焦点顕微鏡での試料の画像化、および核分割及び画像解析について説明します。...

マウス着床前胚でリネージュの仕様を研究するためのタンパク質発現の定量分析

マウスは、妊娠性生物を勉強する広く使用されます。ただし、妊娠の終了は、縦断的な調査を排除する、多数の動物の使用を必要とするこのような研究に必要です。したがって、早期発見のための高周波超音波の非侵襲的手法と妊娠マウスに着床後イベントの監視について述べる。...

マウスの早い妊娠の特性の三次元の高周波超音波の新規な使用

マイクロ Rna (Mirna) は、メッセンジャー Rna (Mrna) の転写調節因子として、短いと高い相同性の RNA シーケンスです。現在の miRNA 検出方法は、感度と特異度で変わる。In situハイブリダイゼーションや免疫染色マウス心臓ティッシュ セクションのマイクロ Rna...

マウス心臓のセクションを使用してその場で交配で発現組織固有の miRNA

再現性をもって RNA の単一分子蛍光 in-situ 個々 卵母細胞における Mrna の数字をカウントするには、交配 (RNA 魚) 非付着性のセルの最適化を行った。卵子採取、トラン...

マウス卵母細胞における定量化するため、Localize Mrna に単一分子蛍光そのままの交配 (SM 魚) の使用

ここでは、マウス胚組織における遺伝子発現をプロファイルする多重化単一細胞mRNAシーケンシング法を提示した。多重化戦略と組み合わせた液滴ベースの単一細胞mRNAシーケンシング(scRNA-Seq)法は、複数のサンプルから単一細胞を同時にプロファイルできるため、試薬コストを大幅に削減し、実験的なバッチ効果を最小限に抑えることができます。...

マウス胚細胞の多重化単細胞mRNAシーケンシング解析

初期マウス胚におけるマイクロRNAのプロファイリング手法について述べます。このプロトコルは、低細胞入力と小さなRNA濃縮の課題を克服します。このアッセイは、初期マウス胚の異なる細胞系統におけるmiRNA発現の経時変化を分析するために使用することができる。...

初期マウス胚からのシーケンシングのための小型RNAライブラリーの調製

学ぶハイスループットその場でハイブリダイゼーション法を用いて、胎児マウスの下部尿生殖路組織におけるmRNA発現パターンの可視化手法です。カスタマイズしたバスケットを使用し、低豊度から高豊度の転写産物まで検出可能で、発生生物学研究に応用できます。

ハイスループットその場でハイブリダイゼーション法

さらに動画を探す