Name: 診断剖検及びラット及びマウスで選択された組織とサンプル集 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 13 s
Description: 学ぶマウスとラットの診断剖検法と組織サンプル採取技術。内臓の観察、臓器・腸間膜リンパ節の採取、組織病理学的評価による健康状態の判定方法を解説します。

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1。剖検のための準備<ol><li>任意の総剖検（肉眼的剖検）の重要な部分は、動物の歴史と調査結果の説明です。 </li><li>あなたの組織病理スライドを読んで獣医病理学者は、動物を見ていない可能性がありますし、背景情報の入力に依存しています。 </li><li>正確には、動物を安楽死させる前にあなたが見るものを説明します。たとえば、"雌マウス、ケージの5の一つ、C57BL/6N、ヘッドが右に傾いて"または"茶色の雄ラット、系統不明、尾の近くで、背部に斑点状の脱毛があると、動物がスクラッチされヘッド"。 </li><li>わかりやすい、明確な、客観的な言語を使用してください。レベル間のカットオフが明瞭に区分されている場合など、"軽度""中程度"、そして"厳しい"などの修飾子は役に立つかもしれません。食品や家庭のオブジェクトの観点で物事を説明することは一般には推奨されません。 </li><li>動物、調査結果、または臓器を計量し、測定することはしばしば有用です。あなたにとって"大きな脾臓は"別の観察者には通常の脾臓かもしれません。脾臓は3センチメートルXの1.5センチメートルを測定するということは、より客観的な情報を提供します。 </li><li> Photodocumentationは非常に貴重なものです。 </li><li>生きた動物、潜在的に感染死体、またはそのようなホルマリンなどの化学薬品を取り扱うために必要なすべての関連職業上の健康と個人用保護具を守ってください。 </li></ol> 2。総死後の場所と、心臓の検査、肺、肝臓、腎臓、および脾臓<ol><li>前の動物の安楽死に必要な物資を集める。最低限、これは解剖ボードまたは類似の作業面、鉗子、はさみ、容器のラベル、固定剤、および任意のメディアやコレクションチューブ/潜在的に必要とされることコップを含める必要があります。 </li><li>簡単に言えば状態、行動、および動物の動きを評価する。呼吸パターン（例えば、急速な、浅い）だけでなく、歩行能力および歩行（例えば、旋回、跛行、震え）を観察し、記録する。 </li><li>常にAVMAガイドラインに従い、あなたの機関で標準的な手順に従って動物を安楽死させる。 </li><li>皮膚やコートの異常、衰弱、または脱水のための動物の体の状態を評価する。あらゆる人工的な操作、インプラント、または瘢痕手術をメモしておきます。 </li><li>すべての外部開口部を（耳、目、鼻、肛門、生殖器の開口部、および口腔内）を調べます。解剖範囲の使用は、よく観察することをお勧めします。 </li><li>背側横臥位で安楽死させたマウスやラットの死体は、クリーンな解剖ボードまたは類似の作業面に置きます。 </li><li>はさみを使用して、腹部内臓、唾液と包皮/陰核腺、頸部および腋窩リンパ節を露出させる、肌を反映し、腹壁を切開、肛門から顎に皮膚のventrumの全長を切開する。徹底的に肺の全葉を調査するのに十分なスペースを開くには、胸骨の上部に、全体で一つの次に、横方向に胸郭の両側最大2カットすることにより、胸部内臓を公開して調べることが胸郭をカット。 </li><li>筋骨格系の構造の外観を調べる。 </li><li>異常のためのすべての器官を評価する。具体的には胸腔内、心臓と肺を見つけ、識別する。特に腹腔内、肝臓、腎臓および脾臓を見つけ、識別する。任意の色の変更、サイズの違い、および行方不明またはmislocated器官に注意してください。表面の一貫性、任意の追加の組織（例えば、質量）、流体のポケット、または腹部/胸部の空洞内の流体の存在に注意してください。 </li><li>肥厚した壁、質量、および/または出血のための特別な注意を払って、コンテンツ、またはコンテンツの不足のための消化管を観察。異常のための実質をチェックするためにメスまたはカミソリの刃を持つ腎臓（左縦断面、正中線上で右クロスセクション、、しかし、オフセンター）を切開する。リンパ節腫大および/または大衆のための腸間膜を確認してください。 </li><li>詰まり、流体ポケット、出血やその他の異常がないか調べ、泌尿生殖器系を調べる。 </li></ol> 3。心臓、肝臓、腎臓、および組織病理学のための脾臓の死後のコレクション<ol><li> （NBF）緩衝ホルマリン10％の適当な量の中性で満たされた適切なサイズは、ラベル付き容器（s）を収集する。組織に固定液の20:1の比率を得るために10％NBFの量を調整します。 </li><li>きれいな解剖ボードまたは類似の作業台の上に背側横臥位でマウスまたはラットの死体を置き、目的の組織を公開。 </li><li>鉗子やハサミを使って死体からの組織を削除します。 </li><li>組織は密接に脂肪と不必要な結合組織を除去するようにトリミングする必要があります。組織は、血液のクリーンでなければなりません;必要に応じてリンスする（または生理）生理食塩水）通常の使用。組織を洗浄するために蒸留水や水道水を使用しないでください。 </li><li> 10％のNBFのコンテナに組織を置きます。 </li></ol><ol><li> 10％のNBFの適切な量で満たされたラベルが付いた容器（S）、適切なサイズを収集します。組織に固定液の20:1の比率を得るために10％NBFの量を調整します。 </li><li>きれいな解剖ボードまたは類似の作業台の上に背側横臥位で、マウスやラットの死体を置きます。 </li><li>気管、心臓、肺を公開。 </li><li>ハサミとピンセットを使用すると、腹側胸部と頸部の領域を覆う皮膚と筋肉を取り除く。 </li><li>ハサミやピンセットを使用して、肺の全葉を徹底的に調べるのに十分広いスペースを開くには、2横方向に胸郭のそれぞれの側までカットして、鎖骨の近くに全体で一つを行うことによって心臓や肺を露出胸郭を削除します。 </li><li>気管を覆うものを含め、胸骨と肋骨から顎に伸びる首の筋肉を切り取る。 </li><li>胸郭の前縁の下にはさみを挿入し、気管を覆う骨のセクションを削除するには、2カット、どちらかの側に1つを、行う。 </li><li>ピンセットで顎の近くに気管をつかみ、鉗子の上に置かれたはさみで気管を介​​して完全にカット</li><li>そっと胸の組織のセット全体がなるまでハサミで腹側組織の接続をsnipping、鉗子を用いて気管の上方に引っ張る（気管、肺、そして心臓、これは時々"摘む"と呼ばれる）身体から削除されています。 </li><li>肺は、作業面に平らに置きます。 </li><li>緩くタイト引っ張らないように注意しながら気管周囲に縫合材料または台所ひもの部分を結ぶ。 </li><li>固定液と注射器を記入し、気管に入るのに十分に小さい針を取り付けます。マウスの場合、26ゲージの針を1ミリリットルまたは3ミリリットル注射器がうまく動作します。ラットの場合は、18ゲージの注射器で5ミリリットル注射器がうまく動作します。 </li><li>気管の開口部に針を挿入し、針の周囲の気管を保持するために鉗子を使用する。徐々に固定液で肺をいっぱいに開始する。 </li><li>完全に膨張するまで肺を埋める。オーバーまたはしないでくださいunderinflate。完全に肺を膨らませるために必要な固定液の量は年齢、系統、および動物の健康状態によって異なります。 <ol><li>以上のインフレは、浸透性および肺組織から発泡液によって検出される。 </li><li> Underinflationはすべての領域でフラット、フルではない表示されて肺から検出される。 </li></ol></li><li>気管から針を外します。 </li><li>縫合材料や肺の固定からの逆流を防ぐために、気管の周囲の文字列を締めます。 </li><li>組織の比率におおよそ20時01固定液を使用して固定液に膨張した肺を置きます。 </li></ol> 5。脳の死後のコレクション<ol><li> 10％のNBFの適切な量で満たされたラベルが付いた容器（S）、適切なサイズを収集します。組織に固定液の20:1の比率を得るために10％NBFの量を調整します。 </li><li>きれいな解剖ボードまたは類似の作業面上に腹側横臥位で安楽死させたマウスやラットの死体を置きます。 </li><li>ハサミやピンセットを使用して、頭蓋冠を覆う皮膚と筋肉を取り除く。 </li><li>はさみを使用すると、枝肉から完全に頭を削除する。 </li><li>大後頭孔、頭蓋骨が脊柱管に開いた開口部に底刃インサートの小さなはさみを使用して、そして維持するはさみのヒントは上向きに指された、直接バックアップと頭蓋の正中線を介​​して切削開始。 </li><li>鉗子を使用して、脳を露出頭蓋冠の両半分をバックに反映。 1。可能な場合、頭蓋骨にはまだ間に固定液にさらされる脳を置きます。これは、これが必要な場合組織は、頭蓋骨から取り外す前に会社になることをできるようになります。多くの病理医は、セクションがまだ頭蓋骨の間に脳から切断されていることを好む。 </li><li>その重力は、組織が頭蓋骨から落ちるのを助けるように穏やかに頭蓋骨を反転させる。 </li><li>曲がったピンセットを使用して、慎重に大脳の下や小脳に向かって移動し、脳の外側の縁に沿って、嗅覚葉から始まる脳の下に鉗子をスライドさせます。優しく鉗子で任意の結合組織や頭蓋骨から落ちてくるから脳を抑制する神経をつまみます。 </li><li>固定液に組織のおおよその20:1の比率を使用して固定液に脳を置きます。 </li></ol> 6。腸間膜リンパ節（MLN）の死後のコレクション<ol><li> PCR分析のための組織採取は無菌操作を使用して実行する必要があります。炎は、滅菌オートクレーブまたは同等の滅菌器具を使用する必要があります。 </li><li>滅菌エッペンドルフチュー​​ブと滅菌済みのハサミとピンセットを組み立てます。 </li><li>きれいな解剖ボードまたは類似の作業台の上に背側横臥位で安楽死させたマウスやラットの死体を置きます。 </li><li>滅菌はさみとピンセットを使用すると、陰部からの胸郭のベースに腹側腹壁を切開する、皮膚と筋肉の両方を削除し、腸を露出させる。 </li><li> MLNは、盲腸のすぐ隣に、大腸に沿って腸間膜組織における腹腔内に配置されています。 </li><li> MLNを検索するには、まず腸の大規模な、コンマ状のセクションである盲腸を見つけます。コロンは盲腸から延びており、それは多くの場合、糞の存在によって識別できます。 MLNは、盲腸に隣接して大腸に沿って腸間膜に位置しています。それは白い腸間膜組織における組織の黄色、卵形または球形の小さなしこりとして同定され、しばしば周囲の腸間膜と脂肪よりも質感でわずかに厚く、硬くなりますできます。方位に必要として、解剖学の教科書を使用してください。 </li><li>無菌操作と滅菌器具を使用して情報を識別で標識したエッペンドルフチュー​​ブにMLNと場所を削除します。 </li></ol> 7。呼吸吸引の死後のコレクション<ol><li>必要な電源を組み立てる - 滅菌ピペット、滅菌済みのハサミとピンセット、気道を介してフラッシュする無菌溶液、およびクリーンな解剖ボードまたは類似の作業面を。 </li><li>解剖ボード上の背側横臥位で安楽死させたマウスやラットの死体を置く。 </li><li>ラットにおける気管支吸引液の場合は、気管を通って気道にアクセスする。ラット、気管を介して、または鼻咽道経由でアクセスのいずれかの鼻の吸引のため。マウスの気管支や鼻の吸引液の場合は、鼻咽道を通じて、気道にアクセスします。 </li><li>鼻と気管支の両方吸引が必要な場合は、まず気管支吸引を行います。新しい滅菌ピペットを用いて鼻の吸引を行います。 </li><li>気管アクセス（ラットの推奨方法）： <ol><li>離れて皮下組織を公開するために子宮頸部の領域から肌を反映している。 </li><li>唾液腺と気管を露出する頸部の筋肉組織を削除します。 </li><li>滅菌器具を使用して、内腔へのアクセスを許可するために気管を切開する。 （7.7のステップに進む）コレクション全体に無菌状態を維持する。 </li></ol></li><li>鼻咽道へのアクセス（鼻吸引、気管支吸引、気管の小さいサイズのためにマウスのための推奨方法）： <ol><li>この手順は、鼻腔吸引液および気管支吸引の両方に対して実行されることがあります。 </li><li>火炎滅菌またはオートクレーブ滅菌器具を使用して、顎（あご）の関節の断絶と鼻咽道を公開、離れて上顎から下顎を反映している。 （7.7のステップに進む）コレクション全体に無菌状態を維持する。 </li></ol></li><li>滅菌ピペットに液体をサンプリングするのに約1mlを描く。これは通常の生理食塩水かもしれない、リン酸緩衝生理食塩水、またはトリプチケースソイブロス。 （あなたが収集する吸引に応じて、7.8または7.9に進みます。） </li><li>気管支吸引： 1。無菌的に尾側に向け、気管内腔にピペットを挿入し、ゆっくりと気管支や肺にサンプリング液を注入する。ピペットに気管支や肺からのサンプリング液を撤回し、気管からピペットを取り外します。すべての流体のはピペットに返されます。より多くの流体がテストのために必要とされている場合は繰り返します。 </li><li>鼻吸引： <ol><li>無菌的に頭側方を向いている、鼻咽道（マウス）または気管内腔（ラット）にピペットを挿入し、ゆっくりと鼻腔内にサンプリング液を注入する。 </li><li>鼻腔がピペットの先端と鼻口蓋の接触によって到達、または流体の観察により、キャビティに強制的に、半月板が鼻オリフィス（鼻孔）で、または半透明の経口口蓋を通して見える流体として形成すると見られていることを確認してください。流体は、口から出る考えるべきではない。もしそうなら、再度向きをピペット。 </li><li>ピペットに鼻腔からのサンプリング液を撤回し、道や気管からピペットを取り外します。 </li></ol></li><li>無菌的にテストのために適切なメディアまたは容器にサンプルを移す。 </li></ol> 8。代表的な結果<img src="/files/ftp_upload/2966/2966fig1.jpg" alt="図1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図1"> 図1マウスの腹部と胸部の臓器。これらの器官は、動物が最初に（臓器のいずれも腹腔内にも存在する他の臓器を公開するために移動されていない）を開いたとき、通常は表示されます。）胸腺、b）の心臓は、c）の肺は、d）はダイアフラム、e）の肝臓、F）小腸、g）の盲腸、h）の膀胱。 <img src="/files/ftp_upload/2966/2966fig2.jpg" alt="図2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図2"> 図2マウスの腹部および後腹膜臓器。腸と肝臓を持ち上げて（または削除）に移動している場合は、これらの臓器CAnを見られる。）肝臓（参照用）、b）の腸（参照用）、c）の胃、d）の脾臓、E）腎臓、f）は下行結腸、g）を子宮。 <img src="/files/ftp_upload/2966/2966fig3.jpg" alt="図3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図3"> 図3。雄の生殖器官。これらは大きく、性的に成熟した雄では大きくなる可能性があります。）精嚢と凝固腺、b）の精巣には（マウスとラットで開いたまま鼠径輪を介して陰嚢から腹腔内に押し込ま）、c）の膀胱、 d）の包皮腺、e）の精巣上体。 <img src="/files/ftp_upload/2966/2966fig4.jpg" alt="図4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図4"> 図4。雌の生殖器官。）非妊娠子宮（マウスやラットが双角の子宮を持っている）b）の卵巣の脂肪パッド、cに埋もれて卵巣、）膀胱、d）の陰核腺（男性の包皮腺に類似） 。

<ol><li>AVMA. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22AVMA+Guidelines+on+Euthanasia%22">AVMA Guidelines on Euthanasia</a>. , (2007).</li>
<li>Feldman, D. B., Seely, J. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFeldman%2C+DB+%22Necropsy+Guide%3A+Rodents+and+the+rabbit%22">Necropsy Guide: Rodents and the rabbit</a>. , CRC Press. (1988).</li>
<li>King, J. M., Dodd, D. C., Roth, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKing%2C+JM+%22The+Necropsy+Book%22">The Necropsy Book</a>. , 4th edn, C.L. Davis Foundation. (2006).</li>
<li>Kittel, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice--Part+2.+A+joint+publication+of+the+RITA+and+NACAD+groups%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--Part 2. A joint publication of the RITA and NACAD groups.</a> Exp Toxicol Pathol. 55, 413-431 (2004).</li>
<li>Fox, J. G. Chapter 1. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKomarek%2C+V+%22The+Mouse+in+Biomedical+Research%22">The Mouse in Biomedical Research</a>. , Elsevier. Vol. 3: Normative biology, husbandry, and models 1-22 (2007).</li>
<li>Morawietz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice--Part+3.+A+joint+publication+of+the+RITA+and+NACAD+groups%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--Part 3. A joint publication of the RITA and NACAD groups.</a> Exp Toxicol Pathol. 55, 433-449 (2004).</li>
<li>Popesko, P., Raijtová, V., Horák, J. Colour Atlas of Anatomy of Small Laboratory Animals. 2, 1st edn, Saunders. vol. 2: Rat, mouse, hamster 91-106 (2002).</li>
<li>Ruehl-Fehlert, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice--part+1%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--part 1.</a> Exp Toxicol Pathol. 55, 91-106 (2003).</li>
</ol>

著者らは、これらのサービスが商業的に提供されているチャールズリバーの研究室で齧歯類の診断ラボ、すべての従業員です。

試験終了時のデータ収集は、動物の剖検が必要な場合があります。見られるものも説明し、すべての組織を調べることを忘れないでください。これらの手順は、感染症のサーベイランスのために剖検し、サンプルコレクションを最適化するために主に設計されていますが、ほとんどは簡単に、おそらく手続きのサブセットのみが採用されるような疑いのある病気の事件や流行の焦点を絞った調査をするようになっている。手順の多くはまた、より一般的に、その後の分析のための研究に固有のサンプルの収集と相まって、全体的な形態学的評価の一環として調査研究の終了時に実行される剖検に関連しています。

<table border="1"><tbody><tr><th>試薬名</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th><th>コメント</th></tr><tr><td>まな板</td><td>サーモエレクトロンCorpの猫＃36114 </td><td>猫＃36114 </td><td></td></tr><tr><td>小さなはさみ</td><td> ROBOZ </td><td> RS - 5910、G204 </td><td> 23ミリメートルブレード、3.5&quot;長さ、ストレート</td></tr><tr><td>培地はさみ</td><td> ROBOZ </td><td> RS - 6808、G207 </td><td> 5&quot; </td></tr><tr><td>大きなはさみ</td><td> ROBOZ </td><td> RS - 6826、G65&quot; </td><td> 6.25&quot; </td></tr><tr><td>鉗子に湾曲した</td><td> ROBOZ </td><td> RS - 8254（M1/21004） </td><td> 4.5&quot;、鋸歯状、わずかな曲線</td></tr><tr><td>鉗子- Microdissecting </td><td> ROBOZ </td><td> RS - 5238 </td><td>ハドソン-（エーヴァルト） </td></tr><tr><td>鉗子 - 組織鉗子</td><td> ROBOZ </td><td> RS - 8160 </td><td>ラットの歯</td></tr><tr><td>火炎滅菌</td><td>オックスフォード実験器具製品</td><td> Bacti - 火葬炉＃5889-001007 </td><td></td></tr><tr><td>外科用メス</td><td>癌の診断、（株） </td><td>指のメス＃60、猫＃FS0060 </td><td></td></tr><tr><td>ピペット</td><td> VWR </td><td>パスツールピペットで5 3 / 4&quot;、カタログ番号14672から400 </td><td></td></tr><tr><td>オートクレーブ袋</td><td>適切な製造会社</td><td>滅菌バッグペーパーポーチ猫＃021002（3100923）E09110 </td><td>パスツールピペット用</td></tr><tr><td>ピペットの電球</td><td> VWR </td><td>猫＃56310-240 </td><td></td></tr><tr><td>エッペンドルフチュー​​ブ</td><td>ザルスタット</td><td> SafeSealマイクロチューブの液2ml、文献[＃72.695 </td><td></td></tr><tr><td>エッペンドルフチュー​​ブ</td><td>アルゴス</td><td> 5mLのマイクロチューブのカタログ番号T20765 - C </td><td></td></tr><tr><td>注射器</td><td> BD（ベックトンディッケンソン） </td><td> 1ミリリットル- 309602 3ミリリットル- 300910 5ミリリットル- 309603 10mLの猫＃309604 20mlの猫＃309661 </td><td></td></tr><tr><td>針</td><td> BD </td><td> 26G - 309625 18G - 305195 </td><td></td></tr><tr><td>中性緩衝ホルマリン</td><td> VWR </td><td> 20L 10％NBF、カタログ番号16004から128 </td><td></td></tr><tr><td>生理食塩水</td><td> ThermoScientific </td><td>バッファリングされた血液銀行の生理食塩水、カタログ番号23-309-178 </td><td></td></tr><tr><td>トリプチケースソイブロス</td><td>ベクトンディッキンソン</td><td> TSB：乾燥、猫＃211825 </td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> HAバッファ、カタログ番号P3813 - 10PAK </td><td></td></tr><tr><td>ホルマリンカップ</td><td> VWR </td><td> 4オンスの猫＃36318から852 8オンス猫＃36318から860 16オンス猫＃36318から858 </td><td></td></tr><tr><td>大ホルマリンカップ</td><td>オークリッジ製品</td><td> 32オンスのコンテナの猫＃0432〜1100 </td><td></td></tr><tr><td>特大ホルマリンカップ</td><td> VWR </td><td> HDPE多目的160オンスコンテナの猫＃89038から282 </td><td></td></tr><tr><td>縫合材料</td><td>ヘンリーシャイン</td><td>編みこみの絹縫合糸、参照番号100から5000、M766750 </td><td>マウスの肺膨張のため</td></tr><tr><td>より糸</td><td>ステープルズ</td><td>猫＃QUA - 46173 </td><td>ラットの肺膨張のため</td></tr></tbody></table>

診断剖検及びラット及びマウスで選択された組織とサンプル集

Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice

動物のコロニーに感染性病原体の診断や発見を支援するために安楽死させた動物から収集された複数のサンプルの種類があります。さらに組織学的処理のための組織の適切な回収方法は、試験結果の品質に影響を与える可能性があります。この記事では、心臓の同定、肝臓、肺、腎臓、脾臓、ならびにそれらの臓器を収集する方法など、基本的な肉眼的検査の実施を説明します。さらに、より困難な組織/サンプル収集技術の4つが実証されています。組織が適切に適切に修正すると、徹底的な組織学的評価を可能にする組織の内部のための固定剤で膨らまする必要があるとして、肺のコレクションと血流が特に困難な場合があります。この記事では、24時間以内に組織の最適な固定を達成するために、固定液で肺を除去し、それを膨らませるステップ法による手順を示しています。組織が柔らかく、容易に破損しているように脳のコレクションは、同様に挑戦することができます。この記事では、組織への最小限のダメージで頭蓋骨から脳を公開し、削除するステップ法による手順を示しています。腸間膜リンパ節では、腸管系ウイルスは、それらが糞便中に流されているよりもリンパ節に長く持続するように多くの共通の感染性病原体を検出するための良いサンプルタイプです。この記事では、検索して無菌的に腸間膜リンパ節を除去する工程の手順により、ステップを示しています。最後に、気道の感染性病原体の同定は、細菌培養や鼻のPCR検査および/または剖検時に採取気管支流体吸引によって行うことができる。この手順では、取得して、細菌培養とPCR検査のために呼吸吸引サンプルを準備について説明します。

この記事では、マウスやラットの基本的な剖検を実施するための手順、および基本的な器官の集合体、ならびに、組織学的微生物学的、およびPCR評価のためのより多くの困難なサンプルの種類を説明します。

動物の感染剤を診断または発見するために、安楽死させた動物から採取し得るサンプルタイプは複数あります...

この手順の全体的な目的は、げっ歯類の基本的な剖検を行うことです。まず、動物に関する基本情報を記録します。次に、内臓を検査します。3番目のステップは、臓器や腸間膜リンパ節などのサンプルを採取することです。最終的に、動物の健康状態は組織病理学やその他の手法を通じて判定されます。一般的に、剖検に慣れていない人は、実務を通じて齧歯類の解剖学的構造を習得する必要があるため、苦労することがあります。これらの手法は、研究コロニーにおける動物の健康状態に関する重要な疑問を解決するのに役立ちます。さまざまな組織の位置や、正常組織と異常組織の見分け方を習得するには時間がかかるため、これらの技術を視覚的に示すことが不可欠です。動物を安楽死させる前に、個体の履歴に関する情報を収集し、身体状態、行動、性別、年齢、体重、系統などの現在の特性を記録してください。この記録は、動物を安楽死させる前に組織を検査する担当者にとって極めて重要な年齢データとなります。適切な個人用保護具を必ず使用してください。解剖台、ピンセット、はさみ、容器用ラベル、固定液、培地、および回収容器を準備します。動物を安楽死させた後、身体状態を評価し、皮膚や被毛の異常、衰弱、および脱水の有無を確認します。また、人工的な操作、インプラント、または手術による瘢痕の痕跡がないかを確認してください。次に、解剖顕微鏡を用いて、すべての外開口部を詳細に検査します。これらには、耳、目、鼻、口、肛門、および生殖器が含まれます。次に、動物を解剖板の上に仰向けに置き、ピンセットで皮膚を持ち上げ、ハサミを使用して肛門から顎まで皮膚を切開します。続いて、皮膚を側方に反転させ、腹壁と肋骨を切り開きます。肋骨格の両側を外側に向かって2か所切開し、胸腔内臓を露出させます。横隔膜を切断します。次に、胸骨の上部を横方向に切断して、肋骨格を取り除きます。次に、露出した胸腔および腹腔の器官を観察します。色の変化、異常な臭い、大きさの相違、および器官の欠損や脱落がないかを確認してください。器官表面の硬さを調べ、組織塊や液体で満たされた嚢胞がないかを確認します。また、いずれの体腔内にも液体が存在するかを確認してください。続いて、胃腸管の検査を行います。腸間膜にリンパ節の腫大や組織塊がないかを確認してください。胃腸管の内容物を記述し、壁の肥厚、腫瘤、または出血がないか注意深く確認してください。腎臓内部を検査するために、メスを用いて、左腎臓を縦断切片に、右腎臓を正中線からずらして横断切片にしてください。実質に異常がないかを確認します。次に、雄の尿生殖器系を観察します。精嚢、精巣、精巣上体、および尿管を確認してください。また、雌では、子宮、卵巣、および尿管を確認します。尿生殖系に閉塞、液体貯留、出血、またはその他の異常がないかを確認します。これらの検査が完了した後、さらなる検討のために標的臓器を分離して摘出します。通常、摘出時に心臓、肝臓、腎臓、および脾臓を回収します。各臓器を固定液に浸すか、あるいは凍結保存や免疫組織化学染色など、これらの組織を必要とするプロトコルの最初のステップに従って適切な固定を行ってください。一般的に、組織は10%NBFなどの保存液に、固定液20：組織1の体積比で浸漬させます。ラットを扱う場合は、鼻腔吸引の前に気管支吸引を行ってください。まず、皮下組織の皮膚を頸部から反転させ、唾液腺と頸部筋肉を露出させます。次に、それらの組織を除去して気管を露出させます。気管に3 mmの切開を加え、1 mLのサンプリング液を満たしたピペットを気管腔内へ、四分の一方向に向けて挿入します。サンプリング液を気管から肺へとゆっくり3回注入（フラッシュ）します。その後、サンプリング液を吸引し、ピペットを気管から取り出します。液のすべてがピペットに戻るわけではありません。したがって、さらに液体が必要な場合は、この工程を繰り返してください。マウスでの試験において、鼻腔吸引液または気管支吸引液のサンプルを採取するには、滅菌済みのハサミを用いて鼻咽頭ATUにアクセスします。側頭下顎関節を切断し、下顎骨を上顎骨から反転させて、鼻咽腔を露出し、鼻吸引液を採取します。1 mLのサンプリング液を充填したピペットを、マウスの鼻咽腔またはラットの気管腔に挿入します。ピペットを頭側に向かせて押し込みます。チップを鼻腔蓋に接触させます。そこで、サンプリング液をゆっくりと注入してください。液が鼻腔に入ると、鼻孔にメニスカスが形成され、半透明の口腔蓋を通しても確認できるはずです。ただし、液体が口から流出した場合は、ピペットの向きを調整してください。完全に注入し終えたら、鼻腔からサンプリング液をピペット内に回収し、ピペットを抜きます。まず、鉗子で気管を把持し、鉗子の直上で切断します。次に、気管をそっと上に引き上げながら組織の接続部を切り離し、胸部組織全体を摘出します。次に、肺を作業面に平らに置き、気管に縫合糸または紐をゆるく結びつけます。結び目を強く締めすぎないようにしてください。締めすぎると、気管に針を通すことができなくなります。次に、シリンジに固定液を満たし、気管を針に固定しながら、針を気管の開口部に挿入します。鉗子を用いて、肺が完全に膨らむまでゆっくりと固定液を注入します。注入する固定液の量は、動物の齢、系統、および健康状態によって異なります。組織の充填不足であれば平坦に見え、充填しすぎた場合は、充填後に組織から泡状の液体が漏れ出します。固定液が肺から逆流するのを防ぐため、気管を囲む縫合糸または紐を締め付けます。その後、膨張させた肺を固定液に入れます。死体を清潔な解剖台の上に腹臥位で置き、ハサミとピンセットを使用して、方腹（calver）上の皮膚と筋肉を取り除きます。次に、小型のハサミを用いて死体の首を切り離します。大後頭孔に下刃を挿入し、頭蓋骨の中線を上向きに切り開きます。その後、ピンセットで頭蓋骨を左右に広げて脳を露出させます。病理学者が頭蓋骨内で脳の切片を作成することを希望する場合は、脳を露出させた状態で頭蓋骨を直ちに10%NBFに浸してください。そうでない場合は、ピンセットまたは指で鼻の周りから頭部を掴み、重力で組織が頭蓋骨から脱落するように、ゆっくりと頭蓋骨を反転させます。嗅球から始めて、湾曲ピンセットを脳の外縁に沿って慎重に滑り込ませます。ピンセットで神経を軽くつまみながら、頭蓋骨に沿って小脳に向かって滑らせます。脳を固定液に入れた後、まず腸の大きなコンマ型の盲腸を確認して、腸間膜リンパ節を探します。腸間膜リンパ節は、盲腸に隣接する腸間膜にある黄色い卵形または球形の組織の塊です。これらは周囲の腸間膜や脂肪よりもわずかに厚く、質感が硬いことが多いです。最初は組織を区別するために解剖用ルーペが有用かもしれませんが、経験を積めば不要になります。ピンセットとハサミを用いて腸間膜リンパ節を単離し、培養、PCR、または組織病理学的検査に使用するための保存チューブに移してください。プロトコールの完了後、病理学者や研究者は、安楽死時の客観的および主観的な状態に関する書面報告書を入手できます。また、固定前の組織に関する客観的な記述、固定液に浸漬された主要な腹腔内および胸腔内器官すべて、脳、腸間膜リンパ節、ならびに鼻腔および気管支吸引物のサンプルが得られます。習熟すれば、簡略化した剖検を30分未満で完了させることが可能です。この手順を遂行する際は、動物の状態および組織の状態に関する観察事項を記録することを忘れないでください。このビデオを視聴することで、灌流後の肺、腸間膜リンパ節、および脳の採取を含む、齧歯類の完全な剖検方法について十分に理解できるはずです。

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