全身ピロカルピン治療:側頭葉てんかんのマウスモデル

まず、スコポラミンとテルブタリン溶液を注射して、ピロカルピンの末梢副作用を最小限に抑えます。次に、てんかん重積状態またはSEを誘発するためにピロカルピン溶液を注射します。ピロカルピンは脳のニューロンの興奮性を変化させます。

その直後に、マウスを暖かいインキュベーターに入れ、SEの誘導を監視します。うなずきや前脚のリズミカルな動き、またはラシーヌスケールのステージ3以上の挙動を探します。次に、マウスを室温のインキュベーターに入れ、動物の行動を監視し続けます。

次に、ジアゼパム溶液を注射してSEを終了させます。最後に、動物の回復を助けるためにブドウ糖溶液を注射します。SE導入後、動物は自発的な再発発作が始まるまで、発作のない潜伏期に入ります。

生

後8週間の雄マウスの体重を量ることから始めます。スコポラミンとテルブタリンの1キログラムあたり2ミリグラム、およびピロカルピン溶液の1キログラムあたり280ミリグラムを作ります。次に、溶液を各マウスに腹腔内に注射し、マウスをケージに戻します。

スコポラミンとテルブタリンの投与の30分後、各マウスにピロカルピン溶液を注射します。ピロカルピン注射直後に、マウスを摂氏28〜30度のインキュベーターに入れて観察します。次に、てんかん重積状態またはSEが誘発されるまでマウスの行動を監視します。ラシーンスケールによるステージ3以上に該当する大脳辺縁系運動発作が検出された場合は、その時間を記録してマウスを監視する。

継続的な運動発作が2分以上続いたら、マウスを室温の新しいケージに入れ、3時間監視を続けて、けいれん発作が継続し、SEが誘発されるかどうかを判断します。次に、ジアゼパム溶液の1キログラムあたり10ミリグラムを注射することにより、SE発症後3時間で行動性急性発作を終了させます。ジアゼパム注射後、回復を助けるために、個々のマウスごとに1ミリリットルの5%ブドウ糖を投与します。

SE導入後1日目に、マウスの体重を量り、さらに1日間インキュベーターに入れます。SE導入後2日目に、マウスの体重を量り、ホームケージに戻します。回復を促進するために湿った食べ物を提供します。最後に、ピロカルピン後7日まで動物の毎日の体重を測定し、体重が増加していない場合は、マウスに5%ブドウ糖を注射します。