In vivoマウス肝灌流:門脈を介してげっ歯類の肝臓に溶液を注入する方法

げっ歯類を麻酔して準備した後、門脈を見つけてその下に糸をスライドさせます。門脈をピンと張らずに、門脈の周りに緩い結び目を作ります。これにより、プロトコルの後半で IV カテーテルが安定します。

IVカテーテルの針を門脈と平行にベベルアップして持ち、内腔(静脈内の空間)に挿入します。針を引っ込め、カテーテルを静脈を通して肝臓内の静脈分岐領域まで押し込みます。

カテーテルを安定させた後、蠕動ポンプ速度を上げます。血液が灌流液に置き換わるため、すぐに肝臓が白くなるはずです。主要な血管を切断して、肝臓からさらに多くの血液と灌流液を排出します。

切断された血管を数回絞って肝臓を膨らませ、血液が完全になくなるようにします。ポンプを切り替えて、緩衝液を肝臓に灌流させます。最後に、結合組織から肝臓が破裂しないように注意しながら、肝臓の膨張を短時間繰り返します。

門脈カテーテルを留置するには、まず鉗子の裏側を使用して腸をマウス腹腔の右側に移動し、門脈を露出させ、湾曲した鉗子を使用して20センチメートルのポリエステルミシン糸を肝臓と上膵頭十二指腸静脈の間の門脈の下にスライドさせます。

鉗子を使用して、糸を動物の反対側に慎重に引っ張り、門脈の下の中央に配置し、門脈の周りに緩い頭上の結び目を作ります。湾曲した鉗子を静脈の下に置き、すべての組織材料を尾に向かってそっと引っ張って静脈をまっすぐにします。

次に、カテーテル針のベベルを上向きにして、鉗子の近くの門脈の下部と平行に置き、針で静脈にそっと穴を開けます。ベベルが静脈の内腔にある場合は、バネ仕掛けの針を引っ込め、ベベルが静脈分岐領域の近くになるまでポリマーカテーテルを静脈に押し込み続けます。

カテーテルの周りに結び目を固定した後、すぐに蠕動ポンプを毎分4ミリリットルに設定し、チューブの雄端をカテーテルの雌端に接続すると、肝臓が白くなり始めます。ドレナージのために腹大動脈を切断します。マスキングテープを使用して、チューブをアンダーパッドに固定します。

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さみを使用して腹部の皮膚を垂直に切断し、血液と灌流液を排出できるようにします。次に、流出した血管をまっすぐな鉗子で数回絞って肝臓を膨らませ、すべての血液が排出されたことを確認し、肝臓組織が白くなるまで肝臓をPBSで灌流します。