卵巣癌の官能化ナノ粒子標的化:卵巣癌細胞による葉酸結合ナノ粒子造影剤の取り込みを促進する技術

葉酸受容体は、卵巣がん細胞の大部分によって過剰発現する膜関連糖タンパク質です。これらの受容体を利用することで、診断用ナノ粒子をがん細胞に標的に送達することができます。

目的の葉酸をキャップしたナノ粒子造影剤複合体の懸濁液から始めます。このナノ粒子懸濁液を卵巣癌細胞の接着培養物に加えます。培養物を所望の期間インキュベートします。

ナノ粒子に官能化した葉酸は、がん細胞に発現する葉酸受容体を認識するのに役立ち、ナノ粒子抱合体と細胞の選択的結合を促進します。その後、原形質膜が陥入し、細胞へのナノ粒子の取り込みと蓄積が促進されます。

がん細胞を採取します。次に、遠心分離して、結合していないナノ粒子を含む上清から細胞を分離します。上清を廃棄し、ナノ粒子を含む細胞を下流のアプリケーションに適したバッファーに再懸濁します。

まず、葉酸で覆われた硫化銅ナノ粒子を新鮮なRPMI培地で適切な濃度で混合します。このナノ粒子溶液を、1ミリリットルあたり400マイクログラムの濃度でSKOV-3細胞を含む調製した24ウェルプレートの各ウェルに加えます。摂氏37度で5%の二酸化炭素で2時間インキュベートします。

この後、0.5ミリリットルの0.25%トリプシンとEDTAで細胞をトリプシン化します。トリプシンを中和するには、少なくとも1ミリリットルの葉酸フリーRPMI 1640完全増殖培地を加え、細胞を123 x g で6分間遠心分離します。細胞を洗浄するには、上清を取り除きます。

細胞を2ミリリットルのPBSに再懸濁し、123 x g で6分間遠心分離します。この洗浄ステップを2回繰り返して、結合していないナノ粒子を除去します。

次に、PBS中の1〜2ミリリットルの2%トゥイーン溶液で細胞を再懸濁します。血球計算盤とトリパンブルーを使用して細胞をカウントします。細胞を2%トゥイーンとPBSの溶液で選択した濃度に希釈して検出します。