細胞の腹腔内注入:マウスモデルの腹膜脂肪組織にがん細胞を送達する方法

腹腔は、腹壁と内臓の内層の間の空間です。腹腔内注射の場合、マウスの頭が腹側腹部を露出させて下に傾くように、生きたマウスの首の領域を拘束することから始めます。

マウスを拘束すると、マウスの動きが制限され、腹部臓器が横隔膜に向かって移動するため、針挿入時の臓器への偶発的な損傷が防止されます。

マウスの腹部を横切る正中線に隣接して、右下象限に針を挿入するポイントを見つけます。この部位は盲腸に穴を開けるリスクを防ぎます。

次に、卵巣がん細胞の単一細胞懸濁液を含む注射器を取ります。選択したポイントに針を約半センチメートルの深さまで挿入し、腹壁の外側だけを貫通します。最後に、がん細胞懸濁液をゆっくりと注入します。これにより、腹腔内の細胞の効率的な分布が保証されます。

マウスをケージに戻し、腫瘍の増殖を監視します。腹腔内の組織は、がん細胞を引き寄せる特定の走化性分子を放出し、がん細胞の移動とコロニー形成を引き起こし、最終的に腫瘍の発生に寄与する可能性があります。

蛍光タグ付き単一細胞懸濁液500マイクロリットルをシリンジにロードします。次に、注射前に細胞のせん断を減らすために、注射器を滅菌キャップ付きの25ゲージ針に入れます。もう一方の手でマウスを拘束し、首筋をつかみ、手のひらと人差し指で尻尾を持ちます。次に、左後ろ足を薬指と小指の間に固定します。腹部臓器に外傷を与えないように、注射中にマウスが動かないようにマウスをしっかりと拘束してください。

腹部を横切る線を想像し、動物の右側と正中線に近い点を見つけます。侵入点は、最後の乳首の頭蓋側にあり、最後の乳首のわずかに内側にあります。盲腸を避け、腸に穴を開けるリスクを減らすために、マウスの右側に針を挿入する準備をします。マウスの腹部の下側領域に針を約0.5センチメートルの深さまで挿入します。プランジャーを引き戻して、針が血管やその他の腹膜臓器を貫通していないことを確認します。

液体が吸引されない場合は、ゆっくりとした定常圧力を使用してサンプルを注入します。次に、針を抜いてマウスをケージに戻します。鋭利物容器に廃棄する前に、注射器のキャップを締めないでください。