卵巣脂肪パッド移植アッセイ:マウスモデルの卵巣脂肪パッドに細胞を導入するためのIn vivo技術

移植により、レシピエント動物の特定の身体部位に細胞または組織断片を移植することができます。これは、腫瘍形成と転移における微小環境の役割を研究するのに役立ちます。

まず、麻酔をかけた免疫不全の雌マウスを腹臥位で準備します。背内側の位置に外科的切開を行い、生殖管を露出させます。卵巣と卵管の近くにある卵巣脂肪パッドを見つけます。先端が鋭い針を使用して、卵巣を損なうことなく、脂肪パッドの途中で穴を開ける切開を行います。

次に、適切な基底膜マトリックスと混合した実験細胞の冷却懸濁液を脂肪パッド切開部に注入します。マトリックスを固化させ、内部の細胞を固定します。卵巣脂肪パッドを腹膜に戻し、切開部を縫合します。マウスが回復するまで待ちます。

移植が成功すると、ファットパッドは適切な微小環境を提供し、注入された細胞の増殖を促進します。マウスを毎週チェックして、卵巣脂肪パッド上の移植細胞の増殖を観察します。

テキストプロトコルに従って同系マウスを麻酔した後、40番のクリッパーを使用して、手術領域の2倍の大きさの領域を剃ります。ポビドンヨードと70%エタノールを使用して、3つの外科的スクラブを行います。次に、解剖顕微鏡下で動物を移動させます。

次に、メスを使用して、卵巣脂肪パッドの真上の背内側位置を切開し、生殖管を露出させます。その後、その部分を滅菌ドレープで覆います。次に、鈍くて細い鉗子を使用して、卵巣脂肪パッドを切開部から正中線に向かって慎重に引っ張り、神経と主要な血管への損傷を最小限に抑えます。

移植による成長遅延を防ぐために、脂肪パッドを最後まで引き裂いたり穴を開けたりすると出血を引き起こすため、脂肪パッドの切開はできるだけ正確に行う必要があります。必要に応じて、凝固剤を使用して出血を止める必要があります。

28ゲージの面取り針を使用して、卵巣の3〜4ミリメートル上の卵巣脂肪パッドに2〜4ミリメートルの深さの切開を行い、針が脂肪パッドの約半分しか通らないようにします。細胞移植の場合は、30ゲージの針で注射器に10〜20マイクロリットルの細胞基底膜マトリックス混合物を充填し、脂肪パッド切開部に注入します。

子宮管移植の場合は、細い鉗子を使用して子宮管を持ち上げ、氷の上に保持された10〜20マイクロリットルの基底膜マトリックスに入れます。次に、0.1〜10〜20マイクロリットルのXL目盛り付きフィルターチップを使用して、組織と基底膜マトリックス懸濁液をピックアップし、脂肪パッド切開部に放出します。基底膜マトリックスが固化し、生殖管を腹膜に戻すまで5分間待ちます。

外科用縫合糸を2針縫合して筋肉を閉じ、小さな創傷クリップまたは外科用縫合糸を使用して皮膚を閉じます。移植後、テキストプロトコルに従って動物が回復するのを待ちます。