JoVE 実験百科事典
がん研究
0 回視聴 • 3:26 分 • April 30th, 2023
ニワトリ絨毛尿膜 (CAM) は、ニワトリなどの特定の脊椎動物の卵に見られる高度に血管新生した膜です。この胚外膜は、非維管束殻膜の内側を覆い、胚と環境の間のガス状酸素と二酸化炭素の交換部位として機能します。
CAMがんモデルを生成するには、完全に発達したCAMを持ち、部分的に開いた殻を持ち、分岐する血管系を露出させる生存可能な受精鶏卵から始めます。CAMがシェルメンブレンから外れていることを確認します。
滅菌の焦げ付き防止リングを血管の分岐点の上に置きます。ガラス棒を使用して、リング内の膜を優しくこすり、その外側の上皮層をこすり落とし、血管系を運ぶ下層の中胚葉層を露出させます。適切な細胞外マトリックスと混合した癌細胞の冷却懸濁液をリングにピペットします。リングは細胞の拡散を制限します。
マトリックスを固化させて、内部の細胞を固定します。卵殻の開口部を密閉し、適切な条件下で卵を孵化させます。中胚葉層内の緻密な血管系は、がん細胞に酸素と必須栄養素を供給し、がん細胞の成長と拡大に適した微小環境を提供します。
移植用のがん細胞懸濁液を調製するには、目的のがん細胞培養物から細胞を回収し、遠心分離によって細胞を沈殿させます。上清を吸引し、細胞を残留培地に機械的に再懸濁します。細胞懸濁液を氷の上に置き、ピペットを使用して培地中の細胞の体積を測定します。次に、20〜100マイクロリットルの培地に1〜200万細胞の濃度で細胞を再懸濁し、1ミリリットルあたり2.7〜4ミリグラムの細胞外マトリックスおよび任意の成長因子または目的の他の添加物を添加します。
がん細胞移植の場合、焦げ付き防止リングを使用して、移植する卵子を最大6個まで卵ラックに置き、透明フィルムドレッシングの端を開いた窓に向かって転がして、殻からフィルムを取り除きます。卵が生存可能で健康であるかどうかを確認してください。理想的な卵は、開いた領域の中心内に小さな分岐血管を持つ大きな血管を持っています。
湾曲した虹彩鉗子を使用して、滅菌済みの焦げ付き防止リングを血管上のCAM上、理想的には分岐点の上に置きます。滅菌ガラス撹拌棒を使用してCAMを穏やかに研磨し、がん細胞懸濁液をリングの中心にピペットします。すべての細胞が送達されたら、6 x 7センチメートルの透明フィルムドレッシングの4分の1片で開口部を密封し、卵子に適切なインプラント指定でラベルを付けます。次に、殻の開口部を直立させて、卵をインキュベーターにしっかりと置きます。