FFPE Tumor Tissue Macrodissection:未染色標本から特定の腫瘍組織を取得する技術

マクロ解剖を開始するには、組織標本を運ぶスライドガラスを取ります。さらに、同じ組織標本を運ぶ参照スライドを採取し、H&E染色用のヘマトキシリンとエオシンを使用して染色します。

正常細胞では、ヘマトキシリンは核酸に青色の染色を与え、エオシン対比染色は細胞タンパク質をピンク色にします。核の濃い青色は、がん細胞と正常細胞の分化に役立ちます。

H&E染色スライドと染色されていないスライドを重ねて、組織標本を位置合わせします。H&E染色スライドで腫瘍細胞を含む部分を見つけます。汚れていないスライドの対応する領域に印を付けます。

染色

されていないスライドから目的の組織をこすり落とします。湿ったピペットチップを使用して、掻き取った組織を収集し、組織検体を簡単に移送できるようにします。組織を溶解バッファーを含むチューブに移します。溶解バッファーの成分は組織を消化し、細胞の成分を放出します。

ライセートを適切なプロテアーゼで処理し、高温でインキュベートします。プロテアーゼは汚染されたDNaseを切断し、それによってDNAを分解から保護します。下流の分析のために組織ライセートを含むDNAを保存します。

適切なH&E染色切片に従って、マクロ解剖に最も適した腫瘍領域のがん組織を特定します。次に、マークされた切片に基づいて癌組織をマクロ解剖します。清潔なカミソリの刃を取り、スライドからがん組織をそっとこすり落とし、一体に保つようにします。ピペットチップを使用して、掻き取った組織を溶解バッファーバイアルに移します。

残りのスライドでこのプロセスを繰り返します。すべての組織がチューブに入れられたら、先端を使用して組織が完全に水没し、壁にくっついていないことを確認します。20マイクロリットルのスブチリシン関連セリンプロテアーゼをバイアルに加え、軽くフリックして混合します。バイアルを摂氏55度のヒートブロックに少なくとも4時間または一晩置き、2時間後にわずかに渦を起こすようにします。