継代培養および輸送のためのスフェロイドの分割:小腸神経内分泌腫瘍からのスフェロイドの増殖および移植の手順

スフェロイドは、3次元の球状構造を形成するために自己凝集した細胞のin vitro培養です。腫瘍スフェロイドを増殖させるには、培養プレートに含まれる適切な細胞外マトリックス(ECM)で培養したスフェロイドから始めます。

マイクロピペットを使用して粉砕し、ECMを機械的に破壊し、スフェロイドを緩めます。スフェロイド-ECM混合物を微量遠心チューブに移します。

低速で遠心分離してスフェロイドをペレット化し、上清中のECMから分離します。使用済みのECM含有上清を廃棄します。スフェロイドペレットを含むチューブを氷上に移し、後続のステップでECMの固化を防ぎます。

ペレットに新鮮な液化ECMを補充します。継代培養の場合は、スフェロイド細胞を解離させ、懸濁液に放出するために上下にピペッティングを繰り返して内容物を混合します。

ス

フェロイド形成細胞とECMを含むこの混合物を新鮮な培養皿に播種します。ECMが固化し、腫瘍細胞の閉じ込めが可能になります。目的の増殖培地を追加します。閉じ込められた細胞の新しいスフェロイドへの成長を促進するためにインキュベートします。

出荷の目的で、スフェロイド-ECM混合物を培養フラスコに移します。ECMが固化し、内部のスフェロイドを閉じ込めます。

細胞せん断を避け、スフェロイドの生存率を維持するために、フラスコに成長培地を満たします。フラスコを輸送用パッケージに移します。

P1000ピペットでECMを機械的に破壊し、滅菌された1.5mmチューブに移します。チューブを摂氏4度で1,000 x g で遠心分離します。次に、すべての上清を取り除き、チューブを氷の上に置きます。ペレットに2〜4倍の量の新しいECMを加え、気泡の侵入を避けながら、上下に10回ピペッティングしてチューブの内容物を混合します。

SBNET混合物中の5〜20マイクロリットルのECMを新しい96ウェルプレートに移し、ECMを固化させます。次に、固化したECMを新しいSBNET培地で覆い、プレートをインキュベーターに入れます。SBNETスフェロイドを別のラボに輸送する場合は、新しいECMでスフェロイドをT25フラスコに移し、ECMを固化させます。フラスコにSBNETスフェロイド培地を入れ、キャップをしっかりとねじ込み、輸送パッケージを準備します。