ラットの背骨からのDRGの収穫:ラットモデルの背骨から背根神経節を抽出する手順

後根神経節またはDRGは、脊髄の両側の椎骨内にとどまる感覚ニューロンの細胞体のクラスターです。それらの主な機能は、感覚ニューロン信号を末梢神経系から中枢神経系に伝達することです。

後根神経節を分離するには、まず収穫したてのラットの背骨を取ります。脊椎を解剖して、頸部、胸部、腰部を分離します。組織の水分補給を確実にするために、脊椎切片を適切な緩衝液に保管してください。

次に、胸部の背側を上に向けて配置します。セクションを2つの横方向の半分に分割します。次に、脊椎セグメントの解剖された半分を内側を上にして固定します。二等分された脊髄(長い管状構造)をセクションのセグメント化された椎骨からそっと切り離し、下にあるDRGを明らかにします。

DRG は、脊柱管内に背側と腹側の根が埋め込まれた明確な白い塊として現れます。細い鉗子で、DRGを慎重に引き抜き、脊柱管から外します。最後に、採取したDRGを、さらなる下流アプリケーションに適した培地に移します。

安楽死させたラットの背側皮膚を70%エタノールで洗浄し、はさみを使用して脊椎を取り除きます。頸部、胸部、腰部を分離し、脊椎切片をPBSを含む10センチメートルの培養皿に入れて、組織サンプルの水分を保ちます。

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細な骨はさみを使用して、背側と腹側の胸椎骨と頸椎骨を開き、脊椎を2つの外側の半分に分離し、組織切片を新鮮なPBSを入れたきれいな10センチメートルの皿に入れます。鉗子を使用して、脊髄を椎骨からそっと切り離し、後根神経節を視覚化します。

各神経節の下に保持された一対の細い鉗子の先端を置き、組織をつかみ、それが留まっている骨腔から引き抜きます。採取直後に、神経組織の細菌汚染を防ぐために、2%ペニシリンとストレプトマイシンまたはペン/連鎖球菌と10%ウシ胎児血清またはFBSを添加したDMEM培地に各神経節を入れます。