ひよこ絨毛尿膜またはCAM腫瘍モデル:腫瘍細胞の神経周囲浸潤をシミュレートするためのInOvo法

特定の転移性がんでは、腫瘍細胞が起源部位から離れて神経組織に浸透し、これは神経周囲浸潤またはPNIと呼ばれる現象です。

PNIは、ヒト上皮組織の基底膜を模倣する絨毛尿膜またはCAMの表面の卵で実証できます。

まず、殻を部分的に開いた生存可能な受精鶏卵を取り、完全に発達したCAMを露出させます。

次に、マウスの脊髄から後根神経節またはDRGを分離します。DRGは、がん細胞が神経周囲腔に侵入する感覚ニューロンのクラスターです。

DRGを蛍光色素を含む適切な培地でインキュベートし、簡単に視覚化できるように標識します。次に、膜を破裂させることなくDRGをCAM表面に転写します。

微生物汚染を防ぐために卵を透明なフィルムで覆います。その後、卵をインキュベートして、DRGのCAMへの統合を容易にします。

インキュベーション後、蛍光標識されたがん細胞をDRGから離れたCAMの乾燥した表面に播種します。乾燥した表面はがん細胞の広がりを最小限に抑え、定期的な腫瘍形成を可能にします。

卵殻の開口部を密閉し、DRGとがん細胞の相互作用を可能にするためにインキュベートします。顕微鏡下では、がん細胞が生着したDRGに向かって成長していることが観察され、PNIが実証されます。

後根神経節を絨毛尿膜に移植するには、細い滅菌鉗子を使用して培養皿内の1つの神経節を注意深くつかみ、新鮮なHBSSの容器で組織を優しく洗浄します。膜に穴を開けないように注意しながら、神経節を1つの卵の絨毛尿膜に置き、すべての卵の開口部を滅菌透明フィルムドレッシングで覆います。すべての卵子が接ぎ木されたら、回転せずに2日間加湿卵インキュベーターに戻します。

インキュベーションの最後に、卵を層流キャビネットに移し、はさみと鉗子を使用して透明なフィルムドレッシングを開きます。次に、5マイクロリットルのHBSS中の0.5〜100万個の蛍光標識腫瘍細胞を、各後根神経節から約2ミリメートルの各卵の絨毛尿膜に添加し、神経節と細胞の間の均一な距離を保ちます。次に、卵を新しいフィルムドレッシングで覆い、卵を回転せずに7日間卵インキュベーターに戻します。