ひよこ絨毛尿膜の収穫:鶏卵から腫瘍移植片含有絨毛膜を単離する方法

絨毛尿膜またはCAMは胚外膜であり、無傷の卵の内殻膜に密接に付着しています。CAMは、自然に免疫不全で高度に血管新生した膜であるため、腫瘍の移植とモデリングに理想的なシステムです。

腫瘍を有するCAMを採取するには、まず、腫瘍とともに移植された完全に発達したCAMを持つ生存可能な受精鶏卵を取ります。CAMにパラホルムアルデヒドを追加します。パラホルムアルデヒドは膜タンパク質を架橋し、膜を硬くして採取を容易にします。

次に、卵の周りを切り取って、卵殻の上部を卵の残りの部分から分離し、腫瘍を担うCAMを除去した殻に取り付けたままにします。CAM の片方の端を持ち上げて、卵の殻からスムーズに取り外します。

その後、採取したCAMを腫瘍移植片を上に向けてパラホルムアルデヒドに入れます。パラホルムアルデヒドは、CAMと腫瘍移植片の形態を保持し、それによって採取された膜をさまざまな下流分析用に準備します。

インキュベーションの最後に、卵を実験室のベンチトップに置きます。注射器を使用して各卵のフィルムドレッシングに穴を開け、各絨毛尿膜に約300マイクロリットルの4%パラホルムアルデヒドを塗布して、組織をわずかに硬化させて採取プロセスを容易にします。

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さみを使用して、絨毛尿膜が取り付けられた卵殻の上半分を取り除きます。殻のサイズを直径約3センチメートルに減らし、後根神経節と腫瘍細胞が移植された絨毛膜の部分を殻片の中心内に保ちます。次に、細い鉗子で絨毛尿膜をつかみ、卵殻から組織を剥離して、ウェルあたり2ミリリットルの4%パラホルムアルデヒドを含む6ウェルプレートの1つのウェルに移します。