miRNA阻害剤による腫瘍内治療のモデリング:マウスモデルにおけるmiRNA阻害剤の腫瘍増殖への影響を分析する方法

miRNA阻害剤は、内因性miRNAに結合してその活性を抑制する、化学的に修飾された小さな一本鎖RNA分子です。

miRNA阻害剤を使用した腫瘍内治療の効果をモデル化するには、生物発光酵素タグ付きがん細胞の懸濁液を採取することから始めます。液化基底膜マトリックスをがん細胞懸濁液に加えます。

得られた混合物を注射器に入れます。免疫不全のヌードマウスの左脇腹に皮下注射します。がん細胞が成長して腫瘍を形成するのを待ちます。

同時に

、miRNA阻害剤溶液を含むチューブに脂質ナノ粒子(生体内送達剤)を添加することにより、治療ミックスを調製します。処理混合物をインキュベートして、miRNA阻害剤を脂質ナノ粒子にカプセル化できるようにします。

治療混合物を腫瘍に直接注射します。脂質ナノ粒子は、腫瘍細胞内にmiRNA阻害剤を送達します。miRNA阻害剤は、中に入ると特定の発癌性miRNAに結合し、標的mRNAへのハイブリダイズを防ぎます。これは癌細胞の死につながります。

最後に、生物発光基質溶液をマウスに皮下注射します。生物発光酵素の存在下では、がん細胞の基質は酸化し、その後の発光を伴います。

生物発光イメージングチャンバーを使用してマウスを視覚化します。腫瘍内注射されたmiRNA阻害剤は、マウスの腫瘍増殖を有意に抑制します。

Cal62ヒト甲状腺癌細胞株を完全培地中で確立した後、1倍10〜6番目の細胞アリコートを摂氏4度の50マイクロリットルのPBSに懸濁し、細胞を同量の基底膜マトリックスと混合します。

27G 1/2インチ針を備えた1ミリリットルの注射器に細胞をロードし、100マイクロリットルのサンプルを6週間齢の免疫不全BALB/cヌードマウスの左脇腹に皮下注射します。注射の2週間後、アンタゴミRまたは対照処理緩衝液を1.5ミリリットルのチューブ内の160マイクロリットルの室温in vivo送達試薬に加え、すぐに溶液を10秒間ボルテックスして混合物の錯体形成を確実にします。

処理液を摂氏50度で30分間インキュベートし、続いて微量遠心分離機で短時間遠心分離します。次に、沈降した治療複合体を新鮮なPBSで6倍に希釈し、完全に混合し、200マイクロリットルの治療液全体を腫瘍に直接注入します。

50マイクロリットルの40ミリグラム/ミリリットルのD-ルシフェリン基質溶液を週に2回、各実験動物に皮下注射し、イソフルラン麻酔後のつま先の挟み込みに対する反応の欠如を確実に確認します。動物をin vivo生物発光イメージングシステムのチャンバーに入れ、標準プロトコルに従ってin vivoイメージングソフトウェアで生物発光シグナルを画像化します。