JoVE 実験百科事典
がん研究
0 回視聴 • 2:22 分 • April 30th, 2023
極低温粉砕または凍結粉砕は、脱細胞化した組織標本を極低温に冷却し、生化学的組成を維持しながら微粉末に粉砕できる技術です。
まず、凍結乾燥組織由来の脱細胞化細胞外マトリックスまたは目的のECMを入手します。みじん切りにして小さな破片を作ります。
次に、みじん切りにしたECMフラグメントをフライス瓶に移します。フライスボールをフライスジャーに導入します。ロードされたミリングジャーを液体窒素に浸し、サンプルを-196°Cで凍結します。
冷却したジャーをクライオミリングシステムにロードします。凍結したサンプルを、適切な頻度で所望の時間クライオミリングにかけます。
クライオミリング中、ミリングジャーは水平位置で放射状に振動します。その結果、フライスボールの慣性により、ジャーの丸みを帯びた端で冷凍サンプルに高エネルギーで衝撃を与え、粉砕することが容易になります。
さらに、粉砕ジャーの動きと粉砕ボールの動きが相まって、サンプルの集中的な混合を促進し、均一な粒度分布を持つ微粉末が得られます。
次に、クライオミルしたECMパウダーをガラスバイアルに移します。湿気にさらされないようにバイアルをしっかりと密封してください。さらに使用するまでサンプルを乾燥させます。
鋭利な手術用ハサミを使用して、脱細胞組織を細かく刻みます。処理された組織を凍結粉砕するには、実験室用ボールミルシステム用の25ミリリットルのステンレス鋼製粉砕チャンバーに、みじん切りにした凍結乾燥ECMを充填し、2つの10ミリメートルのステンレス鋼製粉砕ボールを追加します。
ロードされた粉砕チャンバーを閉じて、液体窒素に3分間完全に沈めます。次に、凍結したサンプルを30ヘルツで3分間粉砕します。液体窒素への浸漬と、ECMが微粉末に粉砕されるまで粉砕を繰り返します。