凍結乾燥による細胞外マトリックス由来泡の作製:脱細胞化組織のECMから生物学的足場を生成する手順

ECM 由来のフォームは、組織微小環境の非細胞成分である細胞外マトリックスを使用して得られる多孔質の足場です。

ECM 由来のフォームを製造するには、まず超微粒子 ECM 粉末の均質な懸濁液をチューブに入れます。ECMの凝集を防ぐために、懸濁液を高温で一定の攪拌でインキュベートします。

次に、シリンジを使用して、液化した ECM 懸濁液を目的の金型に移します。ECMが固まるまで、金型を一晩冷蔵します。ECMは凝固して3次元のネットワーク構造を形成します。

最後に、固体のECMを含む金型を凍結乾燥フラスコに入れます。フラスコを凍結乾燥機システムに接続します。凍結乾燥機内で、サンプルは超低温と低圧にさらされます。これにより、ECMネットワークの格子間空間に氷の結晶が形成されます。

やがて、凍結乾燥機の圧力と温度は徐々に上昇します。これらの条件は昇華を促進します - 固体が溶融を受けるのではなく、直接気体の形に変換するプロセス。

ガス状蒸気が蒸発し、ECM ネットワーク内に空きスペースが残り、それによって多孔質の ECM 由来の足場が生成されます。

ECM懸濁液を摂氏37度でインキュベートし、懸濁液が温まるまで120 rpmで連続攪拌します。次に、0.2モル酢酸を使用して、サンプル懸濁液を目的の濃度に希釈します。3 ミリリットルのシリンジと 18G の針を使用して、目的の金型に ECM 懸濁液を充填します。

フォームは、金型の形状に応じてさまざまな形状で製造できます。型に蓋をして、摂氏マイナス20度またはマイナス80度で凍結します。次に、型を凍結乾燥フラスコに入れます。フラスコを実験室の凍結乾燥機システムに接続し、金型を 24 時間または完全に乾燥するまで乾燥させます。