脊髄抽出:In vitro研究のためのマウス脊髄を分離するためのプロトコル

脊髄摘出の場合は、腹臥位の安楽死マウスから始めます。毛皮による潜在的な汚染を防ぐためにエタノールをスプレーします。

頭から尾までの正中線を切り取り、皮膚を開いて下にある組織を明らかにします。マウスの頭蓋骨を調べて、頭蓋骨と頸椎をつなぐ頭蓋頸部接合部を見つけます。

次に、頭頸部接合部を垂直に切開して、頭頸部の接続を切断します。5番目の腰椎まで脊椎を解剖します。続いて、5番目の腰椎で脊椎を切断して、下部椎骨レベルからの接続を切断します。

次に、マウスを仰臥位に回します。腹膜と胸壁を切り裂き、腹腔と胸腔の両方を露出させます。脊柱にアクセスするために、腹膜および後腹膜器官を切除します。

肋骨を切断して、脊柱を体の他の部分から分離します。最後に、分離された脊髄を冷たい生理食塩水ですすぎ、血液汚染物質を洗い流します。

CO2チャンバーで動物を安楽死させた後、毛皮を70%エタノールに浸し、乾燥させます。マウスを腹臥位に固定し、首の後部から腰椎まで頭尾側に伸びる正中線切開を行います。

次に、鉗子を使用して真皮弁を両側に持ち上げ、皮下組織を露出させます。頭蓋頸部接合部が特定されるまでマウスの頭蓋骨を触診します。動物に対して垂直に角度を付けたハサミを使用して、頭蓋頸部接合部で頸部の筋肉と脊椎を切断します。次に、脊椎を尾側に解剖し、はさみを使用して第 5 腰椎で完全な尾側切断を行います。

次に、マウスを仰臥位に置き、首から腹部までの正中線に沿って切開した後、皮膚を横方向に引っ込めてから腹膜を切り開きます。

頭蓋側で、はさみで胸壁を開きます。腹膜および後腹膜臓器を切除した後、鉗子と外科用ブレードを使用して肋骨を切断し、脊柱から約5ミリメートルの肋骨を突き出させます。体の残りの部分から脊柱を取り除き、冷たいPBSで2回洗浄します。