$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
エクソソームは、細胞から体液中に分泌される細胞外小胞構造です。生体液から特定のエクソソームを捕捉するには、まずストレプトアビジンでコーティングされた磁気ビーズをチューブに取り入れます。
このチューブに、ビオチン化抗ヒト抗体を加えます。抗体に存在するビオチンは、磁気ビーズに存在するストレプトアビジンに対して高い親和性を持っています。これにより、抗体と磁気ビーズが
結合します。
次に、抗体標識磁気ビーズを含むチューブにタンパク質が豊富なブロッキング溶液を追加します。ブロッキング溶液中のタンパク質は磁気ビーズ上の遊離部位に結合し、エクソソーム結合の特異性を高めます。
次に、エクソソームが豊富なサンプル生体液をチューブに補充します。チューブを攪拌しながらインキュベートします。生体液中のエクソソームは特定の表面受容体を示し、磁気ビーズの表面に付着した抗体に結合するのを助けます。
次に、チューブを磁場に置きます。磁場の影響下で、エクソソームに結合した磁気ビーズがチューブの表面に付着します。次に、マイクロピペットを使用して、チューブから残りの生体液を吸引します。
最後に、チューブを磁場から取り出し、適切なバッファーを加えてエクソソーム結合ビーズを溶出します。これらのエクソソーム結合ビーズは、さらなる下流分析に使用できます。
スト
レプトアビジンでコーティングされた磁性微粒子の1ミリリットルあたり10マイクログラムを含むストック溶液を再懸濁し、495マイクロリットルのPBSを含む微量遠心チューブに5マイクロリットルの溶液を加えます。ビーズを洗浄するには、まずチューブを磁気ラックに1分間置き、ビーズを乱さずに慎重にバッファーを取り除きます。
次に、チューブを非磁性ラックに移します。500マイクロリットルのPBSを加え、ピペットでビーズを洗浄します。これを合計3回行います。最終洗浄後、ビーズを490マイクロリットルのPBSに再懸濁し、1ミリリットルあたり1ミリグラムのストック溶液から5マイクロリットルのビオチン化マウス抗ヒトCD63抗体を加えます。
ピペッティングで溶液を混合します。サンプルローテーターを90度で5秒間往復回転させ、5度で1秒間振動するようにプログラムします。チューブをローテーターに入れ、室温で30分間プログラムを実行します。
次に、チューブを磁気ラックに5分間移します。ビーズを500マイクロリットルのPBSで3回洗浄し、カゼインを含む490マイクロリットルのPBSに再懸濁します。サンプル識別をチューブにラベル付けし、10マイクロリットルのサンプルを追加します。
数
回ピペットでサンプルを抗体結合ビーズと混合します。次に、チューブをサンプルローテーターに移し、同じプログラムを室温で2時間実行します。次に、磁化されたラックを使用して、500マイクロリットルの1M Tris-Hydrochlorideバッファーでビーズを3回洗浄します。エクソソームは磁化されたビーズに結合します。