0 閲覧数 • 3:14 分 • April 30th, 2023
マウス腎臓の薄い切片を調製するには、まず、採取したてのマウス腎臓を入手します。腎臓をろ紙に移し、乾燥させて、ビブラトーム検体ホルダーへの最適な接着を確保します。
次に、ビブラトーム標本ホルダーの基部に塗布されたシアノアクリレート接着剤の薄層を使用して、尿管側を下にして腎臓を取り付け、腎臓を直立位置に固定します。検体ホルダーをバッファートレイに移します。
トレイに適切なバッファーを入れて、腎臓の上面を完全に浸します。トレイを囲む氷浴は、スライス中の熱の蓄積による組織の損傷を防ぎます。ビブラトームブレードを適切な角度、速度、振幅に設定します。厚さパラメータを調整して、希望の厚さの組織切片を取得します。
操作中、ブレードは横方向に振動して前進し、組織標本を貫通します。振動ブレードにより、より少ない圧力で切片化が可能になり、組織の変形が最小限に抑えられ、組織の形態を維持しながら、目的の均一な腎臓組織切片が生成されます。
その間、組織の生理学的状態を模倣するために、適切な冷却緩衝液を含むマルチウェルプレートを組み立てます。次に、スライスした組織切片をバッファーに移します。最後に、組織切片を低温で保存し、さらに下流の分析を行います。
鈍い端の鉗子を使用して、準備した腎臓をそっとつかみ、氷冷のKRB溶液から取り除きます。すぐに腎臓を吸収紙の上に約2〜4秒間置き、余分な外部水分を取り除きます。腎臓を吸収紙の上にそっと転がして、腎臓がビブラトーム段階に最適に接着するように、実質のすべての側面が乾燥
していることを確認します。すぐにシアノアクリレート接着剤の薄層をビブラトーム標本プレートの基部に塗布し、鈍い端の鉗子を使用して、腎臓を尿管側を下にして接着剤で覆われた領域に置きます。鉗子の平らな端で腎臓の上部に約10〜20秒間ゆっくりと下向きの圧力をかけ、接着剤を乾かします。
検体プレートをバッファートレイの底にしっかりと固定し、腎臓の上部が完全に浸るようにKRB溶液のレベルを調整します。自動ビブラトーム切片化の場合は、ビブラトームブレード切断サイクルの開始位置と終了位置を腎臓から0.5〜1センチメートル離して選択し、腎臓面全体が切断されるようにします。
刃が腎臓に接触していることを確認しますか確認して、自動切断プロセスを開始します。鉗子を使用して、腎臓から解放された切片を収集し、すぐに個々のウェルに移します。