排尿筋平滑筋細胞の単離:ヒト膀胱標本からDSM細胞を得るための酵素消化手順

排

尿筋平滑筋 (DSM) は、膀胱壁内に存在する細胞で、膀胱の主要な機能単位を構成します。これらの細胞は弛緩して膀胱内の尿の貯蔵を促進し、収縮して尿を放出します。

DSM細胞を単離するには、まず採取したヒト膀胱検体を採取します。検体を洗浄して、血液や破片の痕跡を取り除きます。続いて、粘膜表面を上に向けて組織を固定します。脂肪、血管、粘膜層を切除して、下にある排尿筋層を露出させます。次に、粘膜のない組織を小さな断片に切ります。

組織断片をパパインを含む消化カクテルで処理し、インキュベートします。タンパク質分解酵素であるパパインは、細胞を一緒に保持する細胞外マトリックス内のタンパク質の消化を促進し、マトリックス内の細胞の緩みを開始します。次に、パパイン含有上清を取り除きます。

組織断片にコラゲナーゼ酵素懸濁液を加え、生理学的温度でインキュベートします。コラゲナーゼは細胞外マトリックスを分解し、DSM細胞の解離を促進します。生理学的温度でのインキュベーションは、DSM細胞の完全性を維持するのに役立ちます。コラゲナーゼ含有上清を廃棄します。

組織断片を氷冷バッファーで洗浄し、残留酵素を除去します。次に、それらをバッファーに再懸濁します。酵素処理された組織断片を穏やかに粉砕して、未放出細胞の完全な解離を確実にし、DSM細胞の単一細胞懸濁液を得る。DSMセルは、さらに使用するまで低温で保管してください。

まず

、全厚の膀胱検体を調べます。粘膜を上に向けて、漿膜を下に向けた標本を、氷冷のDSで満たされたシリコーンエナンチオマーでコーティングされた150mmの丸い皿に固定し、鋭い解剖によってすべての粘膜を慎重に取り除きます。

粘膜のない排尿筋平滑筋またはDSMの断片をいくつか切り取ります。3〜6個のDSMピースを、パパインとジチオスレイトールまたはDS-Pを含む1〜2ミリリットルの予熱DSを入れたチューブに入れます。摂氏37度で30〜45分間インキュベートし、10〜15分ごとにチューブを振ってください。

インキュベーション後、DS-Pをチューブから取り出し、DSM片を氷冷DSで短時間洗浄します。DSMピース付きのDSを新しいチューブに移し、DSMピースをチューブの底に残してDSを取り外します。コラゲナーゼII型またはDS-Cを含むDSを1〜2ミリリットルをチューブに加え、時々振とうしながら摂氏37度でインキュベートします。

DS-Cを廃棄し、酵素処理したDSM片を氷冷DSで5〜10回洗浄します。最後の洗浄後、DSをチューブ内に残し、火で研磨されたパスツールピペットでピースを穏やかに粉砕して、単一のDSMセルを放出します。